problemi di clonaggio

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Metodologia biochimica.Le bioscienze ele biotecnologie in laboratorio. Nuova edizione
John Walker, Keith Wilson

Darwin
Jonathan Howard

Embriologia umana
William J. Larsen

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

Laboratorio

Tecniche

problemi di clonaggio

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Tecniche di Laboratorio:

Didattica e Relazioni

InsideBlog

Siti Scientifici

Protocolli Laboratorio

Siti Scientifici

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

prandoFDA
Nuovo Arrivato

Prov.: Brescia
Citt�: Botticino

17 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2012 : 15:55:50

buongiorno ricercatori!

sto subclonando l'ORF di un gene di 1500bp in due plasmidi diversi (uno per espressione eucariotica, l'altro � un costrutto lentivirale)

ho disegnato una coppia di primer a monte e a valle del sito di inserzione per verificare se l'inserto c'� o meno

col primo plasmide tutto bene: lo screening delle colonie ha generato dei prodotti di pcr di 400 bp (quindi senza inserto) e 1900 bp (con inserto!)

per il secondo plasmide invece non trovo nessun prodotto di pcr!

vedo solo il mio controllo positivo di reazione (cio� il plasmide originale) che generea un prodotto piccolo (circa 300 bp)

domanda: come � possibile che siano cresciute le colonie batteriche (che hanno quindi in qualche modo acquisito la resistenza all'ampicillina) se non trovo nessun prodotto di pcr?

life happens

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2012 : 17:03:37

Di solito possono avvenire 2 cose:
- una quota del plasmide non si � tagliato
- una quota del plasmide si � tagliato con un solo enzima e quindi si � richiuso con la ligasi

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...