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Limpet
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Citt�: Roma

83 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2010 : 13:55:17

Salve a tutti

ho una domanda, magari banale, su T melting di un primer e la temperatura di annealing per mandare PCR.
la Tmelting �, in generale, la temperatura alla quale la met� del DNA si trova nello stato a doppia elica, e l'altra met� in quello denaturato; � dipendente dal suo contenuto in GC (che creano 3 legami H fra i filamenti, quindi ci vuole molta energia per scinderli) da qui la famosa formula per calcolarla

Tm = [4(G + C) + 2(A + T)] �C

capisco che una T superiore a quella di melting provochi una maggiore "denaturazione del DNA" ovvero una > separazione dei filamenti, ma perch� il contenuto in GC condiona l'appaiamento del primer alla sequenza? la T di annealing infatti si calcola su quella di melting -4�C

mi sapete aiutare?

grazie

Limpet
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Citt�: Roma

83 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2010 : 15:18:13

....forse l'ho capito nell'istante stesso in cui ho formulato la domanda....Tm pi� bassa,>appaiamento?

mumble!