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serena.89
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43 Messaggi

Inserito il - 03 luglio 2012 : 13:35:40

Si considera una malattia causata dalla mutazione in un gene (K12) che provoca la sostituzione di una leucina con una Prolina, in posizione 132. ( sostituzione di una R con una C in posizione 395 della coding sequence di K12. Si vuole trovare un siRna capace di silenziare specificamente l'allele mutato. Vi riporto proprio una parte dell'articolo
" siRNAs (19+2 format; 19-nucleotide duplex with two 3' uracyl
nucleotide overhangs) were synthesized by MWG Biotech AG
(Ebersberg, Germany) to screen all possible target sequences
containing the Leu132Pro mutation, plus positive and negative
controls. This T >C point mutation occurs at position 395 in the
K12 coding sequence, numbering by convention where the
initiating ATG, = 1 and excluding the 5'UTR (c.395T> C).

The sense and antisense strands for the mutation-specific siRNA
reagent designated as K12-L132P-1 were 5'-AGA AAC UAU
GCA AAA UCC UU and 5'-GGA UUU UGC AUA GUU UCU
UU, respectively (mutant position underlined"

Ora vi metto pure tutte alcune sequenze che sono state designate:

K12
5'-TCTGGATCAGAAAAAGAAACTATGCAAAATCTTAATGATAGATTAGCTTCCTACCTGGATAAG-3'
K12 mutante
5'-TCTGGATCAGAAAAAGAAACTATGCAAAATCCTAATGATAGATTAGCTTCCTACCTGGATAAG-3'
CCT


K12-L132P-1_____________________AAGAAACUAUGCAAAAUCCUU
K12-L132P-2______________________AGAAACUAUGCAAAAUCCUUU
K12-L132P-3_______________________GAAACUAUGCAAAAUCCUAUU

Non capisco che bisogno c'� di fare tutte queste sequenze se loro gi� sanno la posizione della mutazione ( o forse nn la sanno?) Non ho nemmeno capito il criterio cn cui vengono formate queste sequenze..

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 03 luglio 2012 : 23:43:22

Se citi un artcicolo sarebbe meglio se mettessi anche il riferimento (almeno chi vuole pu� anadarsi avedere l'originale). Mi raccomando il riferimento per�, non allegare articoli al forum!

Il link all'articolo � questo:
Development of Allele-Specific Therapeutic siRNA in Meesmann Epithelial Corneal Dystrophy

Comunque per rispondere alla tua domanda, quando progetti una strategia di silenziamento genico non puoi fare un solo siRNA e sperare di avere tanta fortuna che funzioni, devi disegnare varie sequenze testarle tutte e trovare quella che funziona. Troverai che alcune funzioneranno molto bene, altre poco e alcune affatto.

serena.89
Nuovo Arrivato

43 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2012 : 23:36:40

uh grazie, lo hai linkato tu ;)

Cmq perch� alcune funzionano meglio e altre peggio??? � questione di complementariet�? Inoltre perch� i siRna hanno sempre le due U finali?