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simo897
Nuovo Arrivato

43 Messaggi

Inserito il - 12 settembre 2008 : 10:43:30

Ciao a tutti ho un problema che mi sta facendo impazzire.Sto facendo una curva di crescita su cellule fibroblastoidi (nello specifico cellule mesenchimali) e sto riscontrando seri problemi nella conta cellulare nel senso che non corrisponde. Nel reticolo conto pochissime cellule mentre poi nella realtà quando vado a seminarle mi rendo conto che sono molto più numerose.Sto usando il Trypan Blue...Suggerimenti??Grazie a tutti in anticipo!!!

elly_
Utente Junior

400 Messaggi

Inserito il - 12 settembre 2008 : 16:09:29

magari è una cagata, tipo risospendi bene le cellule prima di prelevare un campione.

memole
Utente Junior

Prov.: Brindisi
Città: brindisi

577 Messaggi

Inserito il - 12 settembre 2008 : 18:47:05

Valuta anche il discorso del fattore di diluizione o, come dice elly, cerca di risospendere bene le cellule prima di contarle.

Pierdomenico
Nuovo Arrivato

Prov.: L'Aquila
Città: L'Aquila

11 Messaggi

Inserito il - 23 gennaio 2009 : 15:28:11

Ho lo stesso problema con i sinoviociti. Io uso la camera di thoma e in genere conto addirittura meno di 20 cellule. Non capisco il problema, potrebbe essere che sfuggono dal reticolo sotto la pressione del vetrino visto che fuori dal reticolo ne vedo tante. Inolte ho potuto osservare che hanno una dimensione esagerata rispetto ad altre linee tipo il neuroblastoma con cui ho lavorato due anni. Escluderei la risposta di elly. Io non ho cluster quando le guardo. Se trovi la soluzione facci sapere.

King D
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Città: Acerra

98 Messaggi

Inserito il - 24 gennaio 2009 : 18:52:47

Dipende anche da dove recuperate la sospensione da contare. Sospendete bene sia in provetta che con il Trypan. Ho avuto lo stesso problema anche io che si è risolto sospendendo molto meglio e con un po' più di pazienza!

Pierdomenico
Nuovo Arrivato

Prov.: L'Aquila
Città: L'Aquila

11 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 10:55:51

Scusa io faccio in questo modo. Utilizzo in rapporto 1:1 tripan e cellule e poi omogenizzo con la gilson 6-7 volte senza fare bolle. Più di questo cosa posso fare? Il problema e che all'esterno del reticolo ne vedo molte mentre all'interno no. Come può essere che l'errata sospensione faccia questo. In findei conto nel reticolo metto meno di 20 micro-litri quindi non esce nulla dalla cameretta. Credo che il problema sia diverso ma ancora non riesco ad identificarlo.