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Derek82
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
 Inserito il - 17 gennaio 2007 : 16:39:19
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Salve.....sto scrivendo in preda al panico xchè sono stato appena bocciato all esame di biochimica 2...chi di voi mi può aiutare a capire il sistema del doppio ibrido?? nn ci ho capito nulla!!! grazieeeeee
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Derek82
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 18 gennaio 2007 : 14:06:47
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| grazie mille sei stato utilissimo.......sei un grandeee |
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chiarwen
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: Roma
28 Messaggi |
Inserito il - 18 gennaio 2007 : 21:31:15
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ehi, a proposito, mi chiedevo, leggendo il post, se conoscevate un metodo simile: anche questo si chiama "saggio del doppio ibrido" e serve per saggiare l'interazione tra due proteine... dovrebbe averlo sviluppato un mio prof... volevo parlarvene un po':
Il metodo è basato sulle proprietà del repressore del ciclo litico del fago lambda, la proteina cI, che ha due domini: uno N-ter di legame sull'operatore e uno C-ter di dimerizzazione, separati da un lungo "braccio" mobile. Il gene è represso se due proteine cI dimerizzano e legano l'operatore (sovrapposto al promotore di lambda). Per saggiare il livello di interazione di due proteine A e B, si trasformano in un E.coli tre tipi di plasmidi: uno che produce una proteina di fusione tra A e l'N-ter della proteina cI del fago lambdoide p22, un altro che produce una proteina di fusione tra B e l'N-ter del repressore del fago lambdoide p434, e l'ultimo che possiede il gene della beta-galattosidasi, lacZ, sotto il controllo di un promotore otenuto dalla fusione di metà del promotore di cI di p22 e l'altra metà di p434. Quindi se A e B interagiscono, si forma un repressore funzionante che può legare il promotore "chimerico" e reprimere l'espressione di lacZ. Quindi si fa un saggio di attività enzimatica per la beta-galattosidasi leggendo semplicemente la densità ottica dopo l'aggiunta di ONPG (che scisso dalla bgal diventa giallo), e si stima la percentuale di attività residua rispetto a un controllo.
Credo sia abbastanza simile al saggio con Gal4 di cui parlavate, ma io non ne avevo mai sentito parlare... qualcuno conosce la mia versione di doppio ibrido? o ha notato differenze significative tra i due metodi?
Spero che il mio intervento sia interessante per qualcuno!!
ciao! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 18 gennaio 2007 : 21:55:37
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| Sì, ci sono molte variazioni del sistema del doppio ibrido, l'idea di base è sempre la stessa, ma alcune vanno meglio in certi casi specifici :) |
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sistema del doppio ibrido
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