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gio87
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 21 settembre 2011 : 12:08:52

Cos� la DHPLC e a cosa serve? Grazie mille.

mollichina di pane
Utente Junior

121 Messaggi

Inserito il - 28 settembre 2011 : 14:30:55

Deneturing high performance liquid chromatography.
E' un metodo con cui rilevare mutazioni puntiformi del DNA.
Separa frammenti di DNA in condizioni parzialmente denaturanti, cio� termostatando la colonna ad una determinata temperatura (quasi denaturazione). In presenza di una mutazione la denaturazione e
l�eluizione del frammento sar� diversa rispetto al non mutato.

gio87
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 30 settembre 2011 : 20:34:55

Citazione:
Messaggio inserito da mollichina di pane

Deneturing high performance liquid chromatography.
E' un metodo con cui rilevare mutazioni puntiformi del DNA.
Separa frammenti di DNA in condizioni parzialmente denaturanti, cio� termostatando la colonna ad una determinata temperatura (quasi denaturazione). In presenza di una mutazione la denaturazione e
l�eluizione del frammento sar� diversa rispetto al non mutato.

Quindi in pratica mi permette di distinguere un frammento di DNA in cui ho una mutazione puntiforme da uno in cui non ho mutazione perch� il frammento mutato viene eluito in tempi diversi lungo questa colonna? Ma di che colonna si tratta? In che senso la vado a termostatare?

mollichina di pane
Utente Junior

121 Messaggi

Inserito il - 07 ottobre 2011 : 14:50:43

In pratica la separazione viene fatta in condizioni quasi denaturanti e poich� il non mutato a quella temperatura denaturer� in un tempo diverso rispetto al mutato, avrai nel cromatogramma dei picchi che usciranno prima e dei picchi (mut) che usciranno dopo.
Invece nel campione non mutato non avrai picchi supplementari.
La dhplc si basa sul meccanismo della ripartizione in fase inversa ad accoppiamento ionico IP-RP-HPLC (ion-pair reverse-phase liquid chromatography).
L'eluizione viene fatta con acetonitrile. La colonna � composta da un copolimero di polistirene e divenilbenzene e l'accoppiamento ionico avviene grazie al trietilammonioacetato (questa � la fase mobile che interagisce sia con la colonna che con il dna).
Spero di essere stata chiara.
Non l'ho mai utilizzata da sola e forse queste sono solo piccole cose che ricordo rispetto a quello che ti pu� servire. Per� ci saranno diversi articoli su pubmed se cerchi!

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