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Autore

Discussione

dulcinea.88
Nuovo Arrivato

7 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2012 : 10:57:21

ciao a tutti! ho avuto il modo di avere alcune domande dello scritto di ingegneria genetica che avr� il 2 luglio, e tra queste ce n'� una in particolare a cui non saprei proprio rispondere, qualora mi capitasse, spero mi possiate aiutare!

la domanda � questa:
come si pu� clonare un frammento di dna ad estremit� nette, prodotto di pcr o della sintesi di cDNA? � possibile clonarlo in modo orientato? discutere

per caso c'entra qualcosa la strategia di Maniatis???

preposizione
Nuovo Arrivato

12 Messaggi

Inserito il - 24 giugno 2012 : 14:50:09

non so cosa sia la "strategia di maniatis"....
so che � un libro e che per giunta non ho mai letto...

comunque: no, con estremit� blunt (nette o cieche) non puoi fare inserzione direzionale.
pensaci: hai un plasmide digerito con un enzima che crea estrmit� blunt. e hai un frammento di pcr blunt. questo � ovvio che pu� inserirsi come gli pare, dritto o storto, in medesima proporzione.

comunque in generei i clonaggi si fanno digerendo il plasmide e inserendovi il frammento che viene legato con enzima T4 ligasi.

se le estremit� sono blunt il clonaggio � comunque pi� difficile perch� � anche pi� facile che il plasmide si richiuda piuttosto che accetti la nuova sequenza. quindi in genere si defosforila dopo digestione blunt. pr aumentare l'efficienza di ligazione evitando che il plasmide si richiuda.
spro di esserti stata d'aiuto. in caso scrivi.
ciao

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 24 giugno 2012 : 15:16:32

Come fai ad avere in anticipo le domande per un esame?

Devi renderlo sticky, ci sono varie strategie, sono sicura che al corso avete affrontato questo argomento.