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gabo1991x
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
 Inserito il - 06 febbraio 2013 : 18:27:26
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Salve a tutti! Sto studiando come fare mutagenesi sito specifica utilizzando PCR ed il processo non mi è molto chiaro!
Ho capito che costruisco due primer che presentano un miss match ovvero che contengono la mutazione che voglio inserire nel mio tratta di DNA ma non capisco poi perchè dopo i cicli di amplificazione e mescolamento ottengo la mia molecola di DNA mutata! grazie
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 07 febbraio 2013 : 13:49:17
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La PCR crea un nuovo filamento con la mutazione. Quindi nell'eppendorf avrai una mix del vecchio plasmide (prodotto in batteri, metilato e senza mutazione) e del nuovo plasmide (prodotto in eppendorf, non metilato e con la mutazione).
Alla mix aggiungi DpnI https://www.neb.com/products/R0176-DpnI che è un enzima che taglia i plasmidi metilati e ti restano solo quelli non metilati (con la mutazione). |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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gabo1991x
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 07 febbraio 2013 : 17:36:00
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| grazie mille :) |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1915 Messaggi |
Inserito il - 07 febbraio 2013 : 19:30:10
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| L'inventore è un Nobel della university of british columbia |
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mutagenesi sito specifica mediata da PCR
Didattica
