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Autore

Discussione

Lego90
Nuovo Arrivato

Citt�: Parma

3 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2013 : 11:57:09

Ciao a tutti.
Ho bisogno di un aiuto per un esercizio di biologia molecolare. Il testo dell'esercizio � il seguente:

"Completare la seguente reazione di PCR sapendo che:
�Si vogliono usare 100 ng di templato e si ha a disposizione una soluzione ad una concentrazione di 0.05�g/�l.
�Si vogliono usare i due primer alla concentrazione finale di 0.2�M e si ha a disposizione una soluzione ad una concentrazione 10�M per entrambi.
�Si vogliono usare i dNTP alla concentrazione finale di 0.4 mM e si ha a disposizione una soluzione ad una concentrazione 10mM
�Si vuole utilizzare 1U di enzima e questo ha una concentrazione di 5U/�l.
�Il tampone di reazione � 5X
�Si � scelto un volume totale di reazione di 50�l
Trovare il volume da aggiungere alla reazione per ogni componente."

Allora: i volumi di templato, polimerasi e tampone non ho problemi a trovarli (dovrebbero essere rispettivamente 2�l, 0,2�l e 10�l; se non ho sbagliato qualche calcolo). Il mio problema sta nel trovare il volume dei dNTP e dei primer conoscendo solo la concentrazione molare... come devo fare?

Grazie in anticipo!

paolettag
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2013 : 16:47:19

Ciao,
� semplicemente una diluizione e ti pu� aiutare la formula Ci x Vi = Cf x Vf qui spiegata molto bene http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/diluizioni.asp
Quindi per un volume finale di 50�l (Vf), una concentrazione finale (Cf) di dNTPs 0.4mM ed una concentrazione iniziale di 10mM userai 2�L di dNTPs di volume iniziale (soluzione madre):
10mM x Vi�l = 0.4mM x 50�l
Vi= (0.4x50)/10= 2�l
Lo stesso vale per i primers di cui userai 1�l
0.2�M x 50�L = 10�M x Vi�L

Lego90
Nuovo Arrivato

Citt�: Parma

3 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2013 : 17:23:38

Citazione:
Messaggio inserito da paolettag

Ciao,
� semplicemente una diluizione e ti pu� aiutare la formula Ci x Vi = Cf x Vf qui spiegata molto bene http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/diluizioni.asp
Quindi per un volume finale di 50�l (Vf), una concentrazione finale (Cf) di dNTPs 0.4mM ed una concentrazione iniziale di 10mM userai 2�L di dNTPs di volume iniziale (soluzione madre):
10mM x Vi�l = 0.4mM x 50�l
Vi= (0.4x50)/10= 2�l
Lo stesso vale per i primers di cui userai 1�l
0.2�M x 50�L = 10�M x Vi�L

aaaah... ora capisco! Non capivo che volume iniziale o finale utilizzare e non avevo pensato che il volume finale era quello dell'intera reazione di PCR.

Grazie mille dell'aiuto!