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emi24
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40 Messaggi

Inserito il - 18 marzo 2013 : 18:11:16

ciao a tutti,
sapreste dirmi se quando si trasfettano cellule con miRNAs o siRNA si usano miRNAs e siRNA sotto forma di doppi filamenti di RNA (dsRNA)che vengono poi svlonti in cellula in modo tale che il complesso RISC trattenga solo un filamento o se le companies vendono giÃ miRNa e siRNa sotto forma di single stranded RNA?

vi ringrazio in anticipo,

Geeko
Utente

Città: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 18 marzo 2013 : 19:09:22

Non sono assolutamente esperto quindi aspettiamo conferma più attendibile, ma di solito penso proprio si tratti di costrutti costituiti da due porzioni complementari corrispondenti al gene da silenziare connesse da un loop (small-hairpin) o spesso un introne che viene rimosso nel processo di splicing. Alternativamente, come in C. elegans, somministri direttamente il dsRNA mediate varie tecniche (microiniezione, feeding, soaking). In ogni caso non penso si utilizzi ssRNA perché oltre ad essere poco stabile non verrebbe incorporato nel macchinario di processamento comune ai pathway dei miRNA e degli siRNA.

emi24
Nuovo Arrivato

40 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2013 : 12:06:14

ti ringrazio ad ogni modo

zerhos
Utente Junior

Prov.: Pisa
Città: Pisa

421 Messaggi

Inserito il - 21 marzo 2013 : 01:09:43

In genere si trasfettano direttamente gli hairpin, dicer processa lo stem loop e uno dei due filamenti viene caricato nel complesso RISC.

In alternativa puoi trasfettare anche plasmidi, i più usati a questo riguardo sono plasmidi con un promotore PolIII U6 che trascrive piccole sequenze, per l appunto microRNA o siRNA.

Generalmente gli hairpin sono più facili da trasfettare rispetto ai plasmidi, ma dipende dalla linea cellulare su cui si lavora e dal tipo di trasfettante (lipofettante in genere).

"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!"
Salvador.Dalì