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Manz
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Manz-64
Prov.: MI, PV
Città: Milano, Mortara


27 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2007 : 14:45:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Manz Invia a Manz un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sarò breve, conciso, generico e lapalissiano:

che kit utilizzate (e conseguentemente consigliate o sconsigliate) per creare proteine di fusione?
Come dici? Ma certo, che sono il prescelto! Non penserai mica che fosse quello stupido bambino biondo che spostava gli oggetti col pensiero, e che ha traslocato da casa questa mattina?

http://sabaroth.altervista.org/JMP/ - Journal of Molecular Proctology

biomol
Nuovo Arrivato



65 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2007 : 16:43:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biomol Invia a biomol un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
la produzione di proteine di fusione dipende molto dal tipo di proteina e da quale organismo usi per esprimerla.poi non credo esista un kit ma solo plasmidi che ti permetterre di esprimere la tua proteina come proteina di fusione.
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Manz
Nuovo Arrivato

Manz-64

Prov.: MI, PV
Città: Milano, Mortara


27 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2007 : 16:52:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Manz Invia a Manz un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sì, intendevo naturalmente un kit per la costruzione del solo plasmide. Nello specifico, vorrei fondere una mia proteina di interesse con una proteina fluorescente (*FP), e mi interrogavo sulla possibile esistenza in commercio di kit per la bisogna, in cui fossero in un certo modo automatizzate sia la fusione sia l'eventuale l'excisione della CDS di fusione per successivo reinserimento dove mi pare e piace.
Come dici? Ma certo, che sono il prescelto! Non penserai mica che fosse quello stupido bambino biondo che spostava gli oggetti col pensiero, e che ha traslocato da casa questa mattina?

http://sabaroth.altervista.org/JMP/ - Journal of Molecular Proctology
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 28 febbraio 2007 : 17:54:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io ho utilizzato il sistema Gateway di Invitrogen, tutti i clonaggi avvengono per ricombinazione omologa e puoi trasferire il tuo frammento da un vettore all'altro quando vuoi!
Io ad es. per una fusione C-terminale e N-terminale con GFP ho usato rispettivamente: pcDNA-DEST53 e pcDNA-DEST47

Ecco un po' di link:
http://www.bio.davidson.edu/courses/Molbio/MolStudents/spring2000/patton/gateway.htm
http://www.invitrogen.com/Content/Online%20Seminars/gateway/23.htm
http://www.tcd.ie/Genetics/staff/Noel.Murphy/recombinant%20dna%20ge4021/gatewayman.pdf

Ciao
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Manz
Nuovo Arrivato

Manz-64

Prov.: MI, PV
Città: Milano, Mortara


27 Messaggi
Inserito il - 01 marzo 2007 : 22:40:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Manz Invia a Manz un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie GFPina! Il tuo nominare l'Invitrogen mi ha fatto tintinnare un campanello molecolare interiore e ho trovato due prodotti che consiglio a tutti (nonostante il prezzo esorbitante - per me -) e che hanno come sottotitolo "è esattamente quello che stai cercando!"

https://catalog.invitrogen.com/index.cfm?fuseaction=viewCatalog.viewProductDetails&productDescription=5115&catname=European%20Main

Trattasi di GFP TOPO TA Cloning (N e C terminale!)
Come dici? Ma certo, che sono il prescelto! Non penserai mica che fosse quello stupido bambino biondo che spostava gli oggetti col pensiero, e che ha traslocato da casa questa mattina?

http://sabaroth.altervista.org/JMP/ - Journal of Molecular Proctology
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