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annasic
Nuovo Arrivato



4 Messaggi
Inserito il - 27 gennaio 2014 : 18:51:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di annasic Invia a annasic un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ho bisogno di un aiuto
Ho fatto un saggio di discriminazione allelica in real time maho problemi con i risultati..mi escono solo i mutati e gli etero..ma non i wild type...anche quelli che sapevo essere noti come omozigoti wild type sono venuti etero..come mai??mi sapete spiegare che cosa c'e' che non va?se sbaglio qulcosa nelle impostazioni?
grazie milleee

Govinda
Nuovo Arrivato



4 Messaggi
Inserito il - 30 gennaio 2014 : 20:56:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Govinda Invia a Govinda un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, la domanda è generica ma proverò a rispondere visto che di AD ne ho fatte abbastanza.
Però ho bisogno di info da te:

1) sei sicura di avere tra i tuoi campioni dei campioni NOTI sia WT, sia ETERO e sia OMOZIGOTI MUTATI?

Se non hai campioni omozigoti mutati il problema potrebbe essere il seguente: la fluorescenza emessa dalla sonda per la sequenza mutata spara cosi tanto in piu di quella per la sequenza WT che vedi tutti gli etero come OMO MUT e tutti i WT come ETERO. In questo caso basta che alzi la soglia di emissione minima per le RFU del fluorocromo del WT.

2) Le due sonde hanno stessa T di annealing? Se le hai disegnate tu e non è un saggio comprato, questo potrebbe essere il problema. La MUT alla T di annealing si lega piu facilmente dell'altra.

Fammi sapere, ciao
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