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midichloria
Nuovo Arrivato

75 Messaggi

Inserito il - 08 ottobre 2014 : 13:46:14

Ciao a tutti!
Qualcuno mi sa spiegare il perch� di quella banda super evidente e irregolare? Di sicuro non dipende dai miei campioni ne dal gel (altrimenti si vedrebbe la banda anche in corrispondenza della colonna del marker). Pu� essere che dipenda dal loading dye che uso per caricare i miei campioni? Quale potrebbe essere il problema? � vecchio o si � rovinato?
Grazie!

Immagine:

53,03 KB

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 09 ottobre 2014 : 09:03:44

A me sembrerebbe pi� che altro un problema di gel... forse il voltaggio era troppo alto, portando ad un aumento di temperatura che ha fatto in parte sciogliere il gel?

Il gel era ben solido quando l'hai caricato?

Il perch� non sia uniforme potrebbe dipendere anche dagli elettrodi: sono ben puliti? Piccoli pezzettini di gel possono rimanere appiccicati agli elettrodi e possono rendere il campo elettrico non uniforme.

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midichloria
Nuovo Arrivato

75 Messaggi

Inserito il - 09 ottobre 2014 : 10:57:58

Sisi, il gel era ben solido. Ho fatto correre il gel mantenendo il sistema refrigerato e usando un voltaggio di 80 mV, quindi non credo sia un problema di temperatura elevata o voltaggio.
Prover� a pulire meglio gli elettrodi e vedere se il problema si risolve :)
Grazie!

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 09 ottobre 2014 : 20:17:42

Che loading dye usi? Lo fate voi? Se in un pozzetto non lo metti appare lo stesso quella banda?

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

midichloria
Nuovo Arrivato

75 Messaggi

Inserito il - 10 ottobre 2014 : 13:12:23

E' un 5X sample loading buffer della nzytech. Ho provato a vortexarlo per bene prima dell'uso, e la situazione � un po' migliorata. Se in un pozzetto per� non carico nulla, la banda non appare..

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 11 ottobre 2014 : 02:03:13

Quindi il problema sembra essere il dye. Forse � stato contaminato. Aprire una nuova aliquota? Preparalo "fatto in casa" http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=34 !?

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

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