Approccio per ottenere un animale loxato?

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SpaziO InfinitO
Nuovo Arrivato

Prov.: TO
Citt�: Torino

49 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2015 : 15:26:44

Ciao a tutti! Per ottenere un animale CRE-lox, bisogna ottenere prima un animale "loxato" ed un animale "cre", che successivamente vengono
fatti incrociare. Per ottenere un animale cre basta costruire un costrutto con promotore tessuto-specifico che si inserisce a caso nel genoma (quindi non mi preoccupo di dove si vada a mettere, tanto c'� il promotore specifico), mentre per creare un animale loxato, deve avvenire una ricombinazione omologa (visto che voglio eliminare l'esone fiancheggiato dai siti lox), ma cosa devo fare?
Devo fare un knock-out, un knock-in, un transgene? Mi spiegate per favore?

GRazie!!

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2015 : 19:52:23

Che io sappia (ma non l'ho mai fatto in pratica) si fa un knock-in dello stesso gene fiancheggiato da loxP.

PS: si dice "floxato" (almeno, in inglese si dice "floxed").

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SpaziO InfinitO
Nuovo Arrivato

Prov.: TO
Citt�: Torino

49 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2015 : 21:30:57

Quindi si fa un knock-in + un transgenico per poi ottenere un knock-out dopo incroci specifici. Giusto?

Grazie!

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2015 : 23:12:51

esatto. L'animale Cre volendo pu� essere sia un transgenico che un knock-in in realt�.

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zerhos
Utente Junior

Prov.: Pisa
Citt�: Pisa

421 Messaggi

Inserito il - 21 febbraio 2015 : 01:33:10

Per definizione un animale transgenico per la CRE � un knock-in, tutto ci� che si aggiunge ad un genoma deve essere considerato knock-in.
La differenza sta nella tecnica di inserzione che pu� avvenire tramite random insertion o per gene targeting(che sfrutta quindi l' evento di ricombinazione omologa sito specifica)

"l'unica differenza tra me e un pazzo � che io non sono pazzo!"
Salvador.Dal�

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 22 febbraio 2015 : 02:22:36

Gli animali generati con random insertion non vengono chiamati knock-in, ma transgenici.

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