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moonlight90
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 03 marzo 2015 : 08:53:59

Scritto da MolecularLab Mobile

Buon giorno a tutti, da poco mi sto cimentando in clonaggi....ho un frammento di DNA amplificato con primer contenenti già siti di restrizione ora il mio dubbio è: una volta purificata la pcr da agarosio devo ridigerire la pcr prima di inserirla nel plasmide???????

Lannister
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 03 marzo 2015 : 23:12:19

Si, perché la polimerasi ha amplificato tutto il frammento, su entrambi i filamenti, e ti ha dato una molecola ad estremità piatte... adesso il dna va digerito per ottenere le estremità sticky che ti permetteranno di inserirlo nel plasmide

là
Utente Junior

565 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2015 : 18:18:42

E il plasmide deve essere digerito con gli stessi enzimi di restrizione.

Geeko
Utente

Città: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2015 : 22:23:39

Se invece usi il sistema TA/TOPO cloning non ne avresti bisogno!