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davedylan
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 26 gennaio 2016 : 12:14:54
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Ciao a tutti,
Qualcuno saprebbe spiegarmi come si fa a capire se un vettore(la sequenza di interesse) è collocato nel plasmide in senso o antisenso? quel che non riesco a capire è come sia possibile inserire il vettore in entrambe le direzioni, da cosa è dovuta questa differenza?
Grazie
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Claudio24
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 11 febbraio 2016 : 19:17:16
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 Scritto da MolecularLab Mobile
Ciao senti di solito , il concetto di senso/ antisenso dipende da come avviene la trascrizione ...per cui da come la tua sequenza viene trascritta se 5' 3' è di senso , altrimenti mangiando 3' 5' |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 febbraio 2016 : 12:03:05
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Citazione:
Messaggio inserito da davedylan
Ciao a tutti,
Qualcuno saprebbe spiegarmi come si fa a capire se un vettore(la sequenza di interesse) è collocato nel plasmide in senso o antisenso? quel che non riesco a capire è come sia possibile inserire il vettore in entrambe le direzioni, da cosa è dovuta questa differenza?
Grazie
Innanzitutto il "vettore" non è la sequenza di interesse, ma è il plasmide!
plasmide = vettore
Non è vero però il contrario perchè ci sono anche vettori non plasmidici.
Non inserisci un "vettore" in un plasmide, ma inserisci una sequenza, un frammento che viene comunemente chiamato "inserto".
Ora, l'inserto si può inserire in due direzioni senso o antisenso, questo avviene quando fai un clonaggio blunt, ovvero con estremità piatte, il frammento può legarsi normale o capovolto perchè le due estremità sono uguali.
Se invece fai un clonaggio sticky (con estremità "coesive" o "appiccicose"), eviti questo perchè il frammento si può inserire in una sola direzione.
<se cerchi in google trovi diverse immagini. |
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fabricas
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 26 febbraio 2017 : 18:02:57
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Scritto da MolecularLab Mobile
Ma per verificare l'orientamento dell'inserto posso solo fare un sequenziamento End o c'è qualche metodo più rapido? |
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Vettore senso antisenso
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