Problemi con real time PCR

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PF01
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 31 luglio 2017 : 10:08:03

Buongiorno,
qualcuno sa spiegarmi qual � il problema quando si ottengono curve di amplificazione (real time PCR TaqMan) che in corrispondenza del ciclo soglia hanno un andamento "a zig zag"?
Grazie

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 31 luglio 2017 : 19:24:07

Decisamente non fornisci abbastanza informazioni per aiutarti:
E' la prima volta che usi questi primer o sono vecchi? Li hai testati in una pcr normale per verificare che il prodotto ottenuto sia della lunghezza aspettata? La melting com'�? Ti succede con una coppia di primer o tutte?

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

PF01
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 01 agosto 2017 : 08:37:59

Citazione:
Messaggio inserito da domi84

Decisamente non fornisci abbastanza informazioni per aiutarti:
E' la prima volta che usi questi primer o sono vecchi? Li hai testati in una pcr normale per verificare che il prodotto ottenuto sia della lunghezza aspettata? La melting com'�? Ti succede con una coppia di primer o tutte?

PF01
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 01 agosto 2017 : 08:44:31

Scusa! Hai ragione...sto utilizzando un kit per diagnostica per cui non conosco sequenze di primers e sonda. Di solito questo kit funziona perfettamente, ma ogni tanto mi succede di ottenere le curve con andamento anomalo di cui parlavo sopra. Essendo un sistema "chiuso" non riesco a capire cosa poter fare per risolvere il problema. Tuttavia ho ripetuto la reazione cambiando il lotto del ROX e questa volta � andato tutto perfettamente. Comunque grazie mille e ...scusate la mia inesperienza ad usare il forum

Citazione:
Messaggio inserito da PF01

Citazione:
Messaggio inserito da domi84

Decisamente non fornisci abbastanza informazioni per aiutarti:
E' la prima volta che usi questi primer o sono vecchi? Li hai testati in una pcr normale per verificare che il prodotto ottenuto sia della lunghezza aspettata? La melting com'�? Ti succede con una coppia di primer o tutte?

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 02 agosto 2017 : 19:43:04

Non preoccuparti per il forum. Purtroppo questo e' il problema di usare i kit chiusi, non si hanno abbastanza informazioni per intervenire. La cosa buona e' che di solito c'� lo specialist che puoi chiamare.

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

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