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danielina
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
6 Messaggi |
 Inserito il - 07 marzo 2007 : 20:40:30
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Ciao a tutti, sono una new entry. Mi sto per laureare in C.T.F. e sto scrivendo la tesi, mentre qualche anima pia fa al posto mio gli ultimi exp! Volevo chiedervi quali possono essere le possibili cause di non polimerizzazione,o solo parziale, del Running...dando per scontato di aver seguito il protocollo (anche se comunque un Western è sempre una sorpresa!). Può dipendere dall'APS un po' vecchio? Ma allora perchè lo Stacking non ha dato problemi?? Mi date una mano?
GRAZIEEEE!!!
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DanielaD |
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tommasomoro
Utente Junior
358 Messaggi |
 Inserito il - 07 marzo 2007 : 23:16:26
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get nupage precast gels
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moonycinzia
Utente Junior
234 Messaggi |
Inserito il - 07 marzo 2007 : 23:40:32
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Citazione:
Messaggio inserito da danielina
Volevo chiedervi quali possono essere le possibili cause di non polimerizzazione,o solo parziale, del Running...dando per scontato di aver seguito il protocollo (anche se comunque un Western è sempre una sorpresa!). Può dipendere dall'APS un po' vecchio? Ma allora perchè lo Stacking non ha dato problemi?? Mi date una mano?
scritte...
A me è successo una volta ed era proprio dovuto allAPS.Ma,una domanda mi sorge spontanea,non controlli che sia polimerizzato il resolving prima di colare lo stacking?
Cmq forse lo stacking non ti ha dato problemi perchè ha una percentuale di acrilammide inferiore,forse è solo un'ipotesi azzardata...ma a me fa senso.. |
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danielina
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
6 Messaggi |
Inserito il - 07 marzo 2007 : 23:50:43
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| Non l'ho fatto io questo Wb, l'ha fatto una mia amica...però in genere controlliamo...mah! Cmq grazie!!! |
DanielaD |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2007 : 00:42:04
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anche io direi l'APS... tanto prepararlo fresco non ci vuole niente...
anyway, gloria ai nupage! |
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2007 : 10:03:46
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Confermo APS vecchio...una volta fatto dura circa un mese, cmq basta che lo guardi in controluce...se è grigino è ossidato e lo puoi tranquillamente buttare...
La mia collega ne ha fatto un botto e ora lo conserviamo a -20° e scongeliamo qdo finisce l'aliquota o si ossida...importante che stia a +4° e al buio.
Ciao Chiara |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit- |
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danielina
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
6 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2007 : 10:24:08
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Citazione:
La mia collega ne ha fatto un botto e ora lo conserviamo a -20° e scongeliamo qdo finisce l'aliquota o si ossida...importante che stia a +4° e al buio.
Scusa ma non ho capito...cioè, noi abbiamo varie aliquote che conserviamo a -20°(in freezer)e di volta in volta ne scongeliamo una, non va bene così?? In questo modo sai dirmi più o meno che durata ha?
Cmq oggi mi rifanno il Western con un APS prestato (credo più nuovo) e spero non ci siano problemi. Thanks to all!! |
DanielaD |
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2007 : 15:04:26
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Ok...credo di essermi espressa male...
Dunque le aliquote vengono stoccate a -20°, una volta scongelate le conserviamo a +4°C al buio (non lo congeliamo/scongeliamo ogni volta)
Credo che se conservato -20° possa essere non dico eterno ma quasi...le aliquote a cui mi riferivo prima sono state fatte a settembre del 2004 e funzionano in modo eccellente!
Se l'APS che usi fa schifo in controluce è ossidato (grigio)
cmq potrebbe essereci anche un errore di preparazione dell'APS...hai verificato anche la concentrazione?
Il dubbio che mi viene è che si siano ricordati il temed? Chiara |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit- |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2007 : 17:05:20
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Beh sicuramente se non polimerizza è colpa o dell'APS o del temed!
Anche noi abbiamo aliquote giuste per 2 gel nel -20° e le scongeliamo all'occorrenza, ma una volta è capitato che non si polimerizzasse con l'aps appena fatto e aliquotato e abbiamo semplicemente rifatto le aliquote!
Ma se è successo una volta sola, può essere anche solo una semplice dimenticanza, ad es. il temed come dice Biochina!
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2007 : 19:16:36
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ma cosa intendi dicendo che polimerizza parzialmente?
sono d'accordo con tutti, però vorrei ricordare anche che la polimerizzazione dell'acrilamide dipende, tra le altre cose, dalla temperatura, infatti quando fa molto freddo ci mette moltissimo tempo a polimerizzare. In goni caso anche io credo che il tuo possa essere stato un problema di temed/aps. io in genere faccio delle aliquote di aps in polvere, le conservo al buio e poi, all'uso, sciolgo la polvere in acqua. però non lo conservo una volta usato, ne' lo metto a -20°C.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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danielina
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
6 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2007 : 23:53:21
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Allora, oggi la corsa è andata bene, domani ci sarà lo sviluppo e vedremo che esce...Cmq i nuovi interni pare abbiano l'abitudine di mettere APS e Temed un po' a casaccio, quasi tentando un "tiro da tre"...quindi le cause possono essere molteplici. Grazie a tutti per l'aiuto e le utilissime informazioni!  |
DanielaD |
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2007 : 16:54:29
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Citazione:
In goni caso anche io credo che il tuo possa essere stato un problema di temed/aps. io in genere faccio delle aliquote di aps in polvere, le conservo al buio e poi, all'uso, sciolgo la polvere in acqua. però non lo conservo una volta usato, ne' lo metto a -20°C.
Le aliquote di cui parlo sono di aps sciolto in acqua
Com'è andato 'sto wb alla fine??
Chiara |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit- |
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danielina
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
6 Messaggi |
 Inserito il - 09 marzo 2007 : 17:13:16
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| Hanno sbagliato Ab!!!!! E quindi lunedì si farà di nuovo...nasce proprio sotto un segno sbagliato 'sto Wb!! |
DanielaD |
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2007 : 17:14:40
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Alla faccia della fortuna...
Ma procurarsi dei nuovi assistenti???
Ch. |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit- |
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ChEyEnNe
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2007 : 16:11:47
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LoL dai sono degli interni è "normale" che queste cose capitino......succede ancora anche a me  |
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
Inserito il - 13 marzo 2007 : 09:35:38
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Certo...ovviamente ero ironica nell'affermazione... |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit- |
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Western blot: problemi di polimerizzazione
Didattica
