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Autore Discussione  

scient
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52 Messaggi
Inserito il - 23 febbraio 2021 : 19:58:03  Mostra Profilo Invia a scient un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Buonasera perdonate la mia ignoranza ma non mi ricordo molto sul metodo di bradford e il protocollo che si usa per la determinazione proteica. Ricordo che si doveva usare uno standard noto come BSA. Mi potreste aiutare a fare qualche esempio. Per esempio come si crea BSA 2 mcg,4 mcg,6 mcg.Si prepara la soluzione di 10mg/10 ml di BSA e si preleva 4,6,8 microgrammi per microlitro? HELP ME sareste cosi gentili da potermelo spiegare

sofychan
Nuovo Arrivato



101 Messaggi
Inserito il - 26 febbraio 2021 : 15:51:19  Mostra Profilo Invia a sofychan un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, io usavo un altro metodo colorimetrico per fare la quantificazione proteica (funzionano tutti in maniera simile), e in linea generale dovresti trovare un protocollo dettagliato presso il fornitore da cui hai comprato il kit con i reagenti (si trovano facilmente online). Ce ne sono parecchi, prova a dare un'occhiata e cercare di confrontarli e capirli.
I protocolli (tutti o comunque la maggior parte) riportano anche in maniera guidata le concentrazioni di standard da preparare, come prepararle (io andavo per diluizione seriale in 96-well plate) e il range di concentrazione di lavoro su cui preparare la retta di taratura. In questo range ovviamente dovrebbe stare anche la concentrazione della tua proteina in esame (quindi in genere per sicurezza si testano un paio di concentrazioni della proteina).
Lo standard è solitamente l'albumina (Bovine Serum Albumin).
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scient
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52 Messaggi
Inserito il - 26 febbraio 2021 : 17:34:54  Mostra Profilo Invia a scient un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si ricordo che determinazione proteica si effettua utilizzando il bsa per identificare la concentrazione della proteina sconosciuta ma volevo un esempio numerico o il protocollo per ricordarmi meglio nello specifico. Non trovo il protocollo o degli esempi che mi ricordano la procedura adottata ricordo che dovevo preparare gli standard credo che la concentrazione se non erro fosse 1mg/ml poi dovevo fare credo delle diluizioni e leggere assorbanza volevo ricordarmi meglio la procedura prima della lettura allo spettrofotometro a 595 nm.
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