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angydid
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 27 marzo 2007 : 20:11:12
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ciao,
oggi mi sono imbattuta nella diluizione di un primer liofilizzato di 20 oligonucleotidi e non riesco a capire come si arriva a capire ome si crea una soluzione "figlia" 10 micromolare. mi hanno mostrato una tabella a cui dovrei riferirmi per la diluizione considerando il peso molecolare e il numero dei nucleotidi, il valore trovato è di 151,46 per cui dovrei , dopo aver messo un volume di acqua uguale a i microgrammi del liofilizzato, prelevare 1 microlitro da questa soluzione e aggiungere 14,14 di acqua.
ok,
ora vedendo invece il foglio che accompagna i primers non mi trovo!!
se qualcuno di voi può darmi indicazioni su qualche sito dove vedere questi calcoli ve ne sarei grata!!!
ciao
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
 Inserito il - 28 marzo 2007 : 17:43:49
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| ma sul data sheet che accompagna i primers non c'è scritto che volume devi aggiungere per raggiungere tot concentrazione? |
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biomolecola
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
40 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2007 : 18:03:02
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| ma sicuramente ci sarà già il volume di acqua che devia aggiungere per avere una tot concentrazione finale!In genere è 100pmol/microL. |
W la ricerca |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 28 marzo 2007 : 19:03:30
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Aspetta... aspetta... rileggendo con calma il post questa storia non mi sembra nuova, mi è venuto in mente che questo era il metodo assurdo con cui mi facevano preparare i primers in Germania.
Secondo questo metodo devi diluire i primers in una quantità di acqua (microlitri) pari ai microgrammi di primer liofilizzato così ottieni una stock solution 1 ug/ul.
Poi da questa stock solution ti prepari una "soluzione figlia" 10 micromolare facendo i conti con peso molecolare e numero di basi come hai detto tu!!!
Se poi evita!!! Io ho ancora dei primers fatti così che non capisco più a che cavolo di concentrazione sono!!! 
Diluisci direttamente i primers portandoli direttamente a 10 micromolare (o casomai 100 micromolare se vuoi fare una stock solution più concentrata), utilizzando l'appropriato volume di acqua come dovrebbe essere indicato sul foglietto allegato ai primers! (Come fanno in "quasi" tutti i laboratori!!) Te lo consiglio vivamente!!! 
P.S. il link di prima non funziona, ma non riesco a modificarlo, se tu serve usa questo:
http://www.tib-molbiol.com/it/index.html
poi vai in ologoshop |
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angydid
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 29 marzo 2007 : 12:47:56
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grazie tante per le vostre risposte, penso proprio utilizzerò i vostri consigli e seguirò il volume di acqua indicato sul foglietto dei primers e....i conti vadano a quel paese!!!
grazie,
ciao
a presto!!! |
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rossano
Nuovo Arrivato
15 Messaggi |
Inserito il - 29 aprile 2007 : 08:17:48
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Ammettiamo che tu abbia 95 nmols per primers ( come specificato sul foglietto) e che ti serva preparare degli stock 100 µM dai quali, poi, prelevare le quantità necessarie per le [] delle tue reazioni. Opera come ti consiglio:
95 nmols corrispondono a 0,095 µmols.
Dire che vogliamo una concentrazione finale 100 µM significa che 100 µmols devono essere contenute i 1 litro di soluzione (ricordi il concetto di molarità?).
Per cui facendo una semplice proporzione
100 µmols : 1Lt = 0,095 µmols : XLt
Da cui XLt= 0,00095Lt
Che corrispondono a 0,95 ml o 950 µLt
Per ottenere i tuoi stock 100 µM devi aggiungere 950 µLt di H2O DNase/RNase Free.
Spero di essere stato utile.
Antonio
Se poi vuoi partire dagli ODs o dalle nmols fammi sapere.
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diluizione primers
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