identificare isoforme di splicing

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Autore

Discussione

federica81
Nuovo Arrivato

Prov.: Modena
Citt�: modena

9 Messaggi

Inserito il - 18 settembre 2007 : 12:53:57

Ciao a tutti dai risulati di un RPA ho visto che un gene da me studiato ha due possibili isoforme di splicing. Qualcuno sa come si fa a identificarle in modo da ottenere le due sequenze e promotori che ne regolano l'espressione.
PS: di questo gene si sa molto poco e la sequenza � solo predetta.

Neuroscience
Utente

659 Messaggi

Inserito il - 19 settembre 2007 : 18:28:31

l'identificazione di forme di splicing � gi� un lavoro, quindi � una cosa abbastanza impegnativa e seria.

Devi
1) identificare le cellule che esprimono ad alti livelli l'mRNA che vuoi analizzare con le diverse forme di splicing
2) fare una estrazione e retrotrascrizione ottima, senza degradare l'mRNA
3) il cDNA lo amplifichi con una serie di coppie di primers con la speranza di trovare delle zone in cui manca il pezzo che pensi possa mancare, ed altri dove invece c'� un pezzo in pi� o diverso.
4) poi cloni tutto con primers specifici e con taq ad alta fedelt�...
5) sequenzi tutto confrontando con le sequenze genomiche note.

il resto � storia...