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marina1983
Nuovo Arrivato

18 Messaggi

Inserito il - 16 gennaio 2008 : 20:28:58

ciao a tutti.
ho trasformato e.coli con un vettore di clonazione codificante per una proteina di fusione (proteina fusa con His tag)
dopo avere indotto l'espressione con IPTG ho estratto la frazione proteica totale e poi ho fatto il western blot, utilizzando come anticorpo primario His�Tag Monoclonal Antibody.
il problema � che oltre a rilevare la proteina che mi interessa, ne rilevo molte altre. qualcuno puo dirmi perch�, perfavore?
come faccio a purificare solo la mia proteina con la tecnica cromatografia di affinit� su metallo chelato, se ci sono molte alte proteine con his tag nella frazione proteica totale?
grazie

l�
Utente Junior

565 Messaggi

Inserito il - 19 gennaio 2008 : 19:58:21

ciao! Non ti devi preoccupare. Io purifico proteine con tag di istidina, e il western alle volte mi mostra anche altre bande. Immagino tu conosca il peso molecolare della tua proteina, quindi potresti fare una dialisi per eliminare un po' delle proteine che disturbani, oppure fare una purificazione usando una colonna scambio ionico.