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viola83
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: bologna
12 Messaggi |
 Inserito il - 01 aprile 2008 : 11:23:30
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Ciao a tutti, sono viola ed avrei bisogno di un suggerimento;
è possibile estrarre proteine da biopsie di pochi milligrammi oppure mi conviene aumentare il tessuto in partenza?
Inoltre mi interessa rilevare proteine molto piccole, da 10 kD, so che molti non hanno avuto alcun risultato con questi pesi molecolari, la vostra esperienza mi conferma che sarà difficile rilevarle?
Grazie a tutti!
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annamaria_mi
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: milano
18 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2008 : 14:10:42
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| guarda, ora non ricordo con precisione che proteina fosse, ma tempo fa ho avuto a che fare con una proteina sui 10 KDa e nn ho avuto grandi problemi..usa la membrana di PVDF e non la nitro per il trasferimento, che trattiene più facilmente proteine a basso peso molecolare!..per la prima domanda nn saprei aiutarti, mi spiace.. |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2008 : 14:20:51
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l'unica cosa che puoi fare è vedere quante proteine riesci ad estrarre da pochi mg di biopsia e poi ti regoli con la quantità di tessuto di partenza.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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viola83
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: bologna
12 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2008 : 14:27:26
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| Grazie mille per il suggerimento! |
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annamaria_mi
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: milano
18 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2008 : 17:23:05
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| dimenticavo..ti conviene anche fare un gel con il running ad una percentuale sul 13% di acril..almeno sei sicura di trattenerla piu facilmente! |
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viola83
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: bologna
12 Messaggi |
Inserito il - 04 aprile 2008 : 11:13:19
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Ho provato a fare il western, dopo aver estratto e quantificato le proteine (quindi con pochi mg di bx comunque sono riuscita ad ottenere qualcosa), ed ho usato un markers colorato e visibile anche durante la lettura in chemiluminescenza; ho fatto correttamente il passaggio sulla nitro (perchè vedevo il marker colorato), ma quando sono andata a leggere non ho rilevato nulla, nemmeno il marker che a rigor di logica sarebbe dovuto esserci. Cosa puo' essere andato storto? Il secondario?Il substrato?
Aiuto!! |
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