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AmbienteLife
Utente Junior
Prov.: Bari
Città: Bari
204 Messaggi |
 Inserito il - 10 maggio 2008 : 12:12:30
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Salve, ho due domande da porre..... Sto studiando il metodo colorimetrico per il dosaggio, vorrei capire per quale motivo la DFA (difenilammina) è usata per il DNA e l'orcinolo per l'RNA cioè quali sono i legami che si formano, da quello che ho capito è possibile dosare entrambi i tipi di acidi anche se presenti CONTEMPORANEAMENTE in soluzione questo perchè la DFA è specifica per il DNA è l'orcinolo per l'RNA. Un'ultima cosa, per la denaturazione del DNA ed RNA uso il fenolo, ci è stato detto che per il DNA va usato in ambiente acido e per l'RNA in basico per il fatto che il pH influisce sulla DNAasi e sulla RNAasi ma nn ho capito perchè, cioè per quale motivo influenza questi due enzimi?? Help meeeeee grazieeeeee
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 10 maggio 2008 : 16:06:26
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Citazione:
Messaggio inserito da AmbienteLife
Salve, ho due domande da porre..... Sto studiando il metodo colorimetrico per il dosaggio, vorrei capire per quale motivo la DFA (difenilammina) è usata per il DNA e l'orcinolo per l'RNA cioè quali sono i legami che si formano, da quello che ho capito è possibile dosare entrambi i tipi di acidi anche se presenti CONTEMPORANEAMENTE in soluzione questo perchè la DFA è specifica per il DNA è l'orcinolo per l'RNA.
Rispondo alla prima domanda... 
Possono essere dosati anche se sono presenti entrambi in soluzione perchè avvengono due reazioni chimiche diverse.
La distinzione viene fatta in quanto la difenilammina reagisce con il deossiribosio (quindi riconosce solo il DNA) formando un complesso di colore blu, mentre l’orcinolo reagisce con il ribosio (riconosce solo l’RNA) dando una colorazione verde.
L’assorbanza dei due composti colorati viene letta allo spettrofotometro a due diverse lunghezze d’onda: 595 nm. per la difenilammina e 670 nm. per l’orcinolo.
Se vuoi sapere le reazioni specifiche sono queste:
Nel caso della difenilammina, si ha prima una idrolisi chimica del DNA in ambiente acido e il 2-deossiribosio è convertito in aldeide ("w-hydroxylevulinyl aldehyde"), questo composto reagisce con la difenilammina formando il composto celeste.
(da Wikipedia: http://en.wikipedia.org/wiki/DNA_extraction#Detecting_DNA)
L’orniciolo invece reagisce con i pentosi (test di Bial's) deidratandoli e formando "furfurale" che in presenza di tricloruro ferrico e acido cloridrico forma un precipitato verde.
(da Wikipedia: http://en.wikipedia.org/wiki/Bial%27s_Test)
Sul fatto del fenolo e l'estrazione di DNA e RNA non mi pronuncio, ma ci sono discussioni in proposito!
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AmbienteLife
Utente Junior
Prov.: Bari
Città: Bari
204 Messaggi |
Inserito il - 10 maggio 2008 : 16:24:08
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| Grazie milleeee :-) la biologia molecolare mi sta affascinando molto e purtroppo i prof. universitari non sempre sono disposti a chiarire i dubbi magari anche sciocchi :-D grazieeee per l'aiuto |
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Problema su denaturazione e colorazione
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