Ciao... x individuare il +1 (5' messaggero) esiste la PRIMER EXTENSION... Dopo aver estratto da una cellula l'RNA totale, separi l'm-RNA; in seguito devi matchare con annealing un primer (marcato 32p) ad una distanza presunta dal 5' (circa 70-100 basi); con una reverse transcriptase ti sintetizzi poi il tuo bel cDNA e fai correre su gel denaturante. Confronti infine i risultati ottenuti con le bande di sequenziamento del DNA "padre"...
grazie! quindi..marco il primer in 5', ottengo un frammento elongato..faccio correre su gel..ma che vedro'?il primer e il primer elongato..poi dalla loro distanza cosa deduco la lunghezza dell'mRNA??
Facendo correre su gel denaturante ottieni una banda relativa al'rna stampo e una di cDNA; poi confronti quest'ultima con le bande di sequenziamento del DNA (da cui il tuo rna deriva) e ottieni la base che funge da +1