Quencher non fluorescente

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Autore

Discussione

ritis
Nuovo Arrivato

17 Messaggi

Inserito il - 03 luglio 2008 : 16:15:57

Ciao a tutti, ho da porvi una domanda: mi sto approcciando alla Real Time e nn ho molta esperienza, utilizzo la chimica Taqman e nelle poche prove che ho fatto ho sempre usato sonde Fam e Tamra,( utilizzo questa tecnica per l'individuazione di campioni positivi a virus). Ora nuovo protocollo prevede l'uso di Quencher non Fluorescent, come devo impostare il detector?
Spero di essere stata chiara...

P.S. l'apparecchio � Applied Biosystem

Topogigio77
Nuovo Arrivato

Citt�: Milano

37 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2008 : 12:35:38

Le sonde di nuova generazione sono dette MGB (Minor Grove Binder) e hanno 2 caratteristiche:
- quencer non fluorescente
- sono pi� piccole delle vecchie sonde Tamra (posso avvicinare quindi i primer e fare un amplicone pi� piccolo = maggiore efficienza di amplificazione.
Lo strumento legge fluorescenza, quindi essendo un quencer silenzioso non ha fluorescenza, quindi devi impostarlo su None.
Occhio che se hai sonde Tamra non basta cambiare quencer per farla diventare MGB, bisogna ricostruirle del tutto perch� sono pi� piccole...
ciao

ritis
Nuovo Arrivato

17 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2008 : 16:05:35

grazie mille... sei stato chiarissimo