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Discussione

lallabell
Nuovo Arrivato

24 Messaggi

Inserito il - 11 luglio 2008 : 16:13:44

chi � cos� gentile da dirmi perch� i primer nella RT-PCR li chiamano for e rev se la direzione di sintesi � sempr 5'-3'? o si referisce ad altro?
grazie mille

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 11 luglio 2008 : 18:12:46

RT = retrotrascrizione
PCR = PCR
RT-PCR = retrotrascrizione seguita da PCR!!!

I primers quindi sono come per la PCR forward e reverse!!!

Citazione:
Messaggio inserito da lallabell

...se la direzione di sintesi � sempr 5'-3'?

La direzione di sintesi � comunque sempre 5'-3', ma delle sequenze si considera solo il filamento principale (filamento stampo), quindi se hai la sequenza:
5'- AATGATCGTGTCGATGCTACCCTGATGCTAGTC-3'
� ovvio che in realt� sar�:
5'- AATGATCGTGTCGATGCTACCCTGATGCTAGTC-3'
3'- TTACTAGCACAGCTACGATGGGACTACGATCAG-5'

Quindi il primer forward sar� uguale ad un pezzo di sequenza (ma si attaccher� allo strand 3'-5') e il reverse sar� invece coplementare e invertito rispetto alla sequenza.

lallabell
Nuovo Arrivato

24 Messaggi

Inserito il - 12 luglio 2008 : 10:16:15

ok capito, grazie