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Autore Discussione  

CRISTIAN
Nuovo Arrivato



92 Messaggi
Inserito il - 25 luglio 2008 : 16:54:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao volevo chiedervi un'informazione:
Ho a disposizione un ampilificato di PCR purificato, per il sequenziamento posso usare lo stesso primer (senso o antisenso) utilizzato per l'amplificazione o questo crea problemi?
Grazie mille,

Topogigio77
Nuovo Arrivato


Città: Milano


37 Messaggi
Inserito il - 25 luglio 2008 : 18:28:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Topogigio77 Invia a Topogigio77 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
certo che puoi, anzi...devi!
scherzi a parte, generalmente si fa proprio così
ciao
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valia
Moderatore


Prov.: UK


1001 Messaggi
Inserito il - 25 luglio 2008 : 18:34:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valia  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di valia Invia a valia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
... Si' generalmente si fa cosi', anche se sarebbe ottimale usare primer interni per avere sequenze piu' pulite nel caso in cui il prodotto di PCR fosse sporco e ci fosse aspecifico!
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CRISTIAN
Nuovo Arrivato



92 Messaggi
Inserito il - 28 luglio 2008 : 09:33:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
GRAZIE MILLE, infatti io ho sempre usato gli stessi primer usati per l'amplificazione ma dei colleghi mi hanno fatto notare che si dovrebbero usare primer un pò pià interni..
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Topogigio77
Nuovo Arrivato


Città: Milano


37 Messaggi
Inserito il - 29 luglio 2008 : 14:51:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Topogigio77 Invia a Topogigio77 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
io mi permetto di dissentire...usare primers interni se hai PCR sporche serve a poco...se ti porti dietro Primers dalla prima PCR comunque lavorano e ti danno una brutta sequenza ugualmente.
però, per carità, parere mio...
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valia
Moderatore


Prov.: UK


1001 Messaggi
Inserito il - 29 luglio 2008 : 15:00:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valia  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di valia Invia a valia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Topogigio77
se ti porti dietro Primers dalla prima PCR comunque lavorano e ti danno una brutta sequenza ugualmente.

Se purifichi da gel non hai questo problema....
E comunque la quantita' di primer che ti porti dietro e' irrisoria in confronto alla quantita' di primer nuovi che aggiungi alla reazione! E' lo stesso principio della nested PCR...

Comunque in effetti nella stragrande maggioranza delle volte vanno bene quelli usati per amplificare!

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