ciao a tutti! ho bisogno di un piccolo parere. dopo una prima reazione RT-PCR di 25 cicli mi sono accorto che questi sono insufficienti, quindi ho provato a far ripartire la reazione per altri 3 cicli aggiuntivi. (con volume ridotto alla metà) il risultato che ottengo è attendibile? alla fine la concentrazione dei reagenti resta invariata..
Secondo me 'attendibile' è una parola grossa: diciamo che ti può essere utile per capire qual'è il numero di cicli più adatto. Poi però, fossi in te, ripeterei la PCR per avere un risultato più "pulito" o quantomeno più certo. E' vero che la concentrazione resta invariata, ma questo come dice elly non è importante: piuttosto avendo prelevato del volume hai sicuramente aumentato la probabilità di contaminazione, degradazione del prodotto ecc. Insomma se cerchi un risultato attendibile al 100%, dovresti fare la PCR daccapo dopo aver individuato il numero di cicli sufficiente.
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà (F.W. Nietzsche)