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syd87
Nuovo Arrivato

24 Messaggi

Inserito il - 26 ottobre 2008 : 18:35:07

salve a tutti!! o scoperto questo sito per caso mentrestavo cercando un p� di materiale sulla pcr e sull'elettroforesi del dna....cosi non ho perso tempo e mi sono iscritto!! vorrei farvi due domande anche se vi sembreranno non molto specifiche. la prima � come calcolare la quantit� di dna da unire alla mix di pcr e poi come calcolare la quantit� di dna in una banda elettroforetica facendo riferimento al marker di selezione ....spero di essere stato esauriente grazie in anticipo

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 26 ottobre 2008 : 19:46:38

Citazione:
come calcolare la quantit� di dna da unire alla mix di pcr

Empiricamente. Dipende da che concentrazione iniziale di DNA hai, da cosa parti (cDNA, DNA genomico, amplificato di un'altra PCR etc) da cosa vuoi amplificare, quanto son buoni i tuoi primers etc etc etc

Citazione:
come calcolare la quantit� di dna in una banda elettroforetica facendo riferimento al marker di selezione

Sul manuale del marker ci dovrebbero essere le quantit� di DNA di ogni banda. Se ti serve una misura approssimativa vai a occhio e vedi quale banda si avvicina di pi� alla tua. Altrimenti ti costruisci una retta di taratura con le intensit� delle bande (che puoi ricavare ad es. con ImageJ o software simile) e vedi dove cade la tua. Conta che comunque anche questo � un procedimento molto approssimativo, se vuoi una vera quantificazione devi usare una real-time PCR.

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Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1914 Messaggi

Inserito il - 26 ottobre 2008 : 21:26:54

Giusto per chiudere in bellezza,questo marker che ti permette di fare una approssimazione sulla quantificazione delle bande si chiama massruler,se cerchi con google troverai diverse immagini

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