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valefarfa
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: Teramo
24 Messaggi |
 Inserito il - 18 marzo 2006 : 12:53:11
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Salve a tutti,
qualcuno sa spiegarmi esattamente come funziona questo tipo di chimica nelle reazioni di sequenza???
Grazie ciauz
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 18 marzo 2006 : 22:14:53
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Il Big Dye Terminator e' un metodo di sequenziamento sviluppato da Applied Biosystems. Purtroppo e' piuttosto difficile trovare info accurate perche' il metodo e' brevettato da AB (loro ti danno la mix gia' pronta, la aggiungi al tuo campione, la metti nella loro macchina e hai la tua sequenza....)
Ad ogni modo da quanto mi ricordo il concetto e' lo stesso del metodo dei di-desossi solo che qui hai alcuni nucleotidi coniugati con composti fluorescenti e ingombranti che quindi bloccano la sintesi del DNA.
A questo punto l'idea e' la solita, hai frammenti di varia lunghezza che terminano con un composto fluorescente diverso a seconda della base, li fai correre con elettroforesi capillare e misuri le 4 lunghezze d'onda per determinare la sequenza.
La versione 3.1 e' una versione raffinata della 1.0 e della 3.0, avranno semplicemente cambiato qualche componente della mix.
Vedi questa pagina per maggiori (?) info. |
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Cikobiotech
Nuovo Arrivato
37 Messaggi |
Inserito il - 31 dicembre 2008 : 13:17:02
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Arrivo in ritardo (meglio tardi che mai).Il dideossinucleotide che viene a essere incorporato in corrispondenza della sua base complementare provocherà la terminazione della reazione di sintesi di DNA.
Questi dideossinucleotidi sono legati (non so precisamente ma probabilmente al C-3 dello zucchero) a questo colorante chiamato BigDyeTM che contiene un colorane donatore a base di fluorisceina ,legato mediante un linker costituito da acido aminobenzoico,al colorante accettore a base di diclororodamina(dRhodamine).In seguito un laser ionico ad argon eccita il colorante donatore che trasferisce in modo efficiente l'energia al colorante accettore (ve ne sarà uno per base, ciascuno con un suo spettro di emissione).
Così è possibile far avvenire le quattro reazioni del metodo di Sanger in un unica reazione. Quindi alla fine della reazione poniamo i prodotti in una singola corsia di gel di acrilammide.L'intensità della lunghezza d'onda, che sono 4 (una per base),viene misurata quando i frammenti passano attraverso un rilevatore laser di fluorescenza. Questa informazione verrà inviata al computer che elaborerà il tutto e genererà un output della sequenza e dell'elettroferogramma.
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