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annamaria_mi
Nuovo Arrivato

Prov.: Milano
Citt�: milano

18 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2008 : 16:20:02

c'� qlc che usa la beta-tubulina (55 kDa) come controllo di equal loading per proteine citoplasmatiche nei wb?? ho fatto un paio di western ma non esce mai, nemmeno mezza banda

..non credo che non sia presente nel tipo cellulare in uso (BV2)..sapete aiutarmi??

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2008 : 19:10:18

Da una "velocissima" ricerca in google beta-tubulina � espressa nelle cellule BV2, ed es. guarda qui!
Penso quindi che il problema sia l'anticorpo, puoi fare altre prove aumentndo la concentrazione dell'anticorpo o... cambiare anticorpo!
Io come loading control uso alfa-tubulina e funziona molto bene, se vuoi ti posso dire qual'� l'anticorpo.

annamaria_mi
Nuovo Arrivato

Prov.: Milano
Citt�: milano

18 Messaggi

Inserito il - 04 aprile 2008 : 10:44:28

grazie! l'anticorpo � nuovo, appena preso; abbiamo dovuto ordinare la beta perch� l'avevamo bisogno in rabbit (e alfa-tub era quasi sempre in mouse)..quindi nn � nemmeno un problema di anticorpo vecchio o degradato..prover� ad aumentare la concentrazione!speriamo..

andreone
Nuovo Arrivato

7 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 12:22:58

Se si tratta di anticorpi generici anti alfa oppure anti beta-tubulina non hai necessit� di porti il problema:si tratta di una componente del citoscheletro fondamentale ed abbondante in ogni cellula eucariote (sia alfa che beta poich� dimerizzano alfa-beta).
Esistono per� anticorpi anti-tubulina specifici per alcuni isotipi che possono essere pi� o meno espressi a seconda del tessuto analizzato, ed in alcuni casi espressi proprio per nulla.

gilthanas
Nuovo Arrivato

100 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 12:29:10

alternativamente puoi abbassare la concentrazione del latte, o BSA a seconda di quello che usi, della in cui diluisci l'anticorpo. Non scenderei sotto all'1% per�...se gi� usi questa concentrazione non tiresta che aumentare la quantit� di anticorpo