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Gaia84
Nuovo Arrivato



8 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 10:36:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gaia84 Invia a Gaia84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
premetto che sono un ambientale... prima di farvi gridare allo "scandalo" per la domanda che sto per porvi.
cosa significa che utilizzo il pvx nella produzione di proteine eterologhe?
sfruttando la GFP riesco a identificare e localizzare a livello subcellulare la pvx-gfp... e dopo?
1-sostituzione gfp con il gene di interesse
2-estrazione di proteine da foglie infette
3-purificazione della proteina di interesse con metodologie biochimiche
Illuminatemi!!

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 12:40:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non ho ben capito cosa vuoi sapere...

PVX = potato virus X, immagino sia semplicemente un vettore usato per cellule vegetali
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Gaia84
Nuovo Arrivato



8 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 13:54:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gaia84 Invia a Gaia84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se ho ben capito:
utilizzo il pvx come vettore per le cellule vegetali inserendo anche il gfp per approfiitare della lumincesnza di questa proteina ed inoltre inserisco anche il gene di mio intersse.
la gfp lo inserisco semplicemente per la luminiscenza e per localizarre le proteine infette dalla pianta
il pvx mi permette l'ingresso nella pianta
estraggo le proteine le purifico ed avrò ottenuto la produzzione di proteine eterologhe alla pianta.

sperando che sia esatto... la produzione di proteine eterologhe a cosa potrebbe servire?
potresti farmi un esempio concreto... mi rendo conto che per dei molecolari tale domanda sia banale... ma studiare la metodologia senza contestualizzarla nella realtà mi riesce difficile ed astratto...

Mille grazie!!
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 15:09:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh, ci sono tantissime possibili applicazioni.
Ad es. si utilizza spesso questa tecnica per studiare cosa fa la tua proteina. La esprimi in una cellula che non ce l'ha normalmente in modo da poter controllare più facilmente il suo comportamento.

Oppure puoi utilizzare la tua cellula come "fabbrica" di produzione della tua proteina. E' quello che si fa con l'insulina che viene prodotta facendola esprimere in E. Coli

Nelle piante si possono ad es. far produrre antibiotici peptidici avendo così un modo semplice di somministrare e trasportare un prodotto altrimente molto facilmente degradabile.

Sempre nelle piante puoi esprimere proteine che le rendono immuni a determinati parassiti o più resistenti al freddo etc etc

Oppure puoi semplicemente far esprimere GFP in modo che sia localizzata in determinati organelli per studiarne la morfologia o la distribuzione in diverse situazioni.

Insomma, ci sono mille casi! Sinceramente non ti so dire nello specifico nulla di pvx, non ho mai lavorato con piante, comunque l'idea è questa.
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Gaia84
Nuovo Arrivato



8 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 19:10:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gaia84 Invia a Gaia84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie!!!!
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