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amicia
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24 Messaggi

Inserito il - 17 febbraio 2009 : 10:43:01

Salve a tutti,
sto tentando di costruire un controllo interno di amplificazione partendo dal mio prodotto di amplificazione. L'idea è di clonare il prodotto di amplificazione e aggiungere una sequenza di circa 50 bp, in modo da ottenere un costrutto di dimensioni maggiori. Mi sarei aspettato che la temepratura di melting (TM) del controllo interno di amplificazione risultasse maggiore rispetto al mio prodotto di amplificazione (essendo più lunga), in realtà, utilizzando diversi free software online ho visto che la TM risulta essere inferiore di 2-3 gradi. Qualcuno sà dirmi il motivo?
Grazie a tutti

Ourorobos
Nuovo Arrivato

Prov.: siena
Città: siena

4 Messaggi

Inserito il - 17 febbraio 2009 : 17:06:01

allora mi sembra un po' strano,
o sono variati per qualche ragione i parametri quali la concentrazione salina ad esempi da un controllo all'altro oppure non saprei..

cmq puoi provare a calcolare la temperatura con l'equazione di Nearest-neighbor invece che con software...
è tedioso ma magari i software tengono conto di qualche parametro che non hai visto..

so che non è molto utile..però..