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matteor81
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 10 marzo 2009 : 15:19:27
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Ciao a tutti, ho un piccolissimo problema, con SDS-PAGE dovrei studiare proteine sotto i 15 kDa, ma purtroppo, alla colorazione o al blotting, tutte le proteine sono "sparite", ho provato con gel dal 10 al 15%, Voltaggi dai 100 ai 150, ma nulla, arrivo a vedere (coomassie) bande fino ai 20 kDa circa e poi il nulla più assoluto.
Qualcuno ha suggerimenti?
Ho cercato un pò nelle varie discussioni ma non ho trovato risposte...
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andreone
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2009 : 16:24:34
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| Potresti aver caricato troppo poco campione. Hai quantificato i campioni prima di caricarli? Hai caricato un marker di peso molecolare? Caricandone uno dovresti renderti conto facilmente se la corsa elettroforetica è regolare o se i campioni hanno corso troppo. |
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matteor81
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2009 : 17:16:10
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Ciao Andreone, e grazie per la risposta! I campioni non li ho quantificati, xchè naturalmente, con l'sds, il Bradford mi ha dato problemi, xò ne ho caricato quantità industriali, alla colorazione ho delle bande "enormi". Il marker di peso molecolare c'è, riesco a vedere abbastanza bene le bande fino ai 15 kDa, ma quelle più piccole non ci sono o sono fantasmi. (PS x la corsa dell'SDS-PAGE uso un normale buffer tris-glicina-sds 10%)
ciao e grazie |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2009 : 20:01:44
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Citazione:
I campioni non li ho quantificati, xchè naturalmente, con l'sds, il Bradford mi ha dato problemi
Quantificale subito dopo l'estrazione. |
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tiz83
Nuovo Arrivato
Città: smallville
72 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2009 : 19:52:51
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prova a caricare diverse MW e in diverse quantità, così da avere una differenza!Poi carica diverse quantità di campione?Il voltaggo mettilo a 120V e il trasferiment fallo O.N.
Spero vada bene... |
Non c'è immensità che valga quanto abbiamo vissuto.
Pablo Neruda |
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tiz83
Nuovo Arrivato
Città: smallville
72 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2009 : 19:55:41
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| 3.03g di trizmaBase; 1 g di SDS; 14.4 g di glicina...per il trasferimento devi aggingere metanolo al 20%... |
Non c'è immensità che valga quanto abbiamo vissuto.
Pablo Neruda |
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angemore
Nuovo Arrivato
82 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 12:41:10
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ciao secondo me potresti usare un gel a gradiente 4-12% o meglio ancora un gel tricine-sds (la percentuale la scegli tu). Se vai su google e scrivi tricine-sds gel vedrai che come primo link ti appare uno di nature protocols che puoi scaricare tranquillamente, lì ci sono tutte le informazioni. Spero che ti sia utile  |
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SDS-PAGE sotto i 15 kDa, come fare
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