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diegocadige
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 02 aprile 2009 : 13:23:16

Ciao a tutti, qualcuno mi potrebbe dare la formula per il calcolo del rapporto molare tra il vettore ed l'inserto da usare nella ligazione?
Grazie

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 02 aprile 2009 : 14:39:50

Forse intendi la formula per calcolare le "moli" di vettore e inserto, il rapporto poi � in genere 1:3-1:5
comunque qua trovi una esercitazione dove � spiegato e c'� la "formula"
Clonaggio di un frammento di DNA nel plasmide pGEM e trasformazione di cellule di Escherichia coli (pdf)

diegocadige
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 02 aprile 2009 : 15:19:29

Grazie,
quindi allora dimmi se ho fatto giusto i calcoli, io ho:
V[64.5 ng]3300 bp I dopo l'opportuna diluizione [3.27 ng] 36 bp
usando 3.6 ul di vettore mi esce dal calcolo che dovro' usare 8.23 ng di inserto pari a +/- 2.5 ul questi sarebbero i ul che dovrei usare in una ligation in 10 ul finali. Giusto?

Citazione:
Messaggio inserito da GFPina

Forse intendi la formula per calcolare le "moli" di vettore e inserto, il rapporto poi � in genere 1:3-1:5
comunque qua trovi una esercitazione dove � spiegato e c'� la "formula"
Clonaggio di un frammento di DNA nel plasmide pGEM e trasformazione di cellule di Escherichia coli (pdf)

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 02 aprile 2009 : 18:58:42

Citazione:
Messaggio inserito da diegocadige

quindi allora dimmi se ho fatto giusto i calcoli, io ho:
V[64.5 ng]3300 bp I dopo l'opportuna diluizione [3.27 ng] 36 bp
usando 3.6 ul di vettore mi esce dal calcolo che dovro' usare 8.23 ng di inserto pari a +/- 2.5 ul questi sarebbero i ul che dovrei usare in una ligation in 10 ul finali. Giusto?

Scusa ma che rapporto di inserto:vettore hai utilizzato? 1:3?
A me vengono un po' diversi i calcoli, mi viene 7.6 ng di inserto che corrispondono a 2.3ul
In ogni caso non ti cambia molto se metti un pochino di pi� di inserto, va benissimo 2.5ul (=8.23 ng)