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Autore

Discussione

biologina2
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 02 luglio 2009 : 15:53:41

Voglio produrre in grandi quantit� un polipeptide idrofilico, del peso di 25 kDa, che sar� utilizzato come farmaco per la cura di una malattia. Dispongo del cDNA di questo polipeptide.
Descrivere per punti la strategia che si intende adottare per produrre e purificare efficacemente il polipeptide tenendo conto dei possibili problemi a cui si pu� andare incontro e delle eventuali soluzioni?

memole
Utente Junior

Prov.: Brindisi
Citt�: brindisi

577 Messaggi

Inserito il - 02 luglio 2009 : 19:21:56

-Clona il cDNA in un opportuno vettore di espressione;
-Fai esprimere la proteina in un sistema eterologo (batteri, lieviti, baculovirus, dipende dalle caratteristiche del polipeptide, tenendo conto di eventuali modificazioni post-traduzionali a cui pu� andare incontro);
-Purifica la proteina lisando la cellula ed eventualmente lisando l'organulo nel quale l'hai fatta esprimere;
-Fai un'elettroforesi seguita da un immunoblotting per verificare la presenza della proteina nel lisato
-Effettua delle cromatografie, magari di affinit�, per arricchire la frazione;
- Fai una elettroforesi e un saggio di immunoblotting per verificare che l'arricchimento sia effettivamente avvenuto.