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omega3
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
 Inserito il - 10 luglio 2009 : 19:04:12
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Salve a tutti, mi piacerebbe sapere perchè gli oligonucleotidi antisenso, usati per legarsi agli mRNA e impedirne la traduzione, sono fatti di DNA e non di RNA.
Grazie.
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omega3
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 10 luglio 2009 : 19:19:38
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Poi ho un altra domanda, sempre rimanendo in questo tema.
E' un argomento che non mi è tanto chiaro.
Esperimento degli oligonucleotidi antisenso:
Da quanto mi è stato detto, quando si realizza questo esperimento si usano 2 gruppi di colture cellulari
Coltura 1) Si somministrano gli oligonucleotidi antisenso
Coltura 2) Si somministrano gli oligonucleotidi di controllo
Gli oligonucleotidi di controllo si dividono in:
Senso
Reverse
Mismatched
Scrambled
Essi non possono ibridarsi all'mRNA perchè hanno struttura lievemente diversa dagli oligo antisenso:
Reverse: polarità opposta all'antisenso;
Scrambled: stesse basi dell'antisenso ma disposte a caso;
Mismatched: stessa sequenza dell'antisenso ma alcune basi sono modificate
A) Se gli effetti di inibizione genica si avvertono sulla coltura numero 1, allora sono dovuti esclusivamente all'EFFETTO ANTISENSO
B) Se gli effetti di inibizione genica si avvertono sia sulla coltura numero 1 che sulla 2, allora si parla di EFFETTI NON ANTISENSO
ORa mi chiedo, quali sono questi effetti non antisenso? |
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mikymiky
Nuovo Arrivato
Prov.: Brescia
Città: lonato
45 Messaggi |
Inserito il - 10 luglio 2009 : 22:51:09
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MA.. sei sicuro?! che io sappia gli antisenso sono a RNA! tanto che per indurre l'iRNA in genere si inserisce un vettore che abbia due promotori invertiti alle estremità del gene di cui si vuol produrre appunto il dsRNA! E cmq anche quando inietti un single strain è sempre RNA!
ora non vorrei aver detto cavolate.. ma per quel che so io, non ho mai sentito che si iniettassi DNA!
Per la seconda domanda non ho ben capito cosa vuoi sapere! però cmq tieni presente che spesso l'RNA si appaia ad altre molecole di RNA per impedirne ad esempio il riconoscimento da parte del ribosoma, o di altre proteine; così come può modificarne la struttura secondaria e quindi la funzione o creare un sito di taglio per qualche endonucleasi! E questi fenomeni si verificano normalmente nella cellula, proprio come eventi regolatori, che non richiedono i perfetto annealing tra le due sequenze! |
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Oligonucleotidi Antisenso
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