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riccio
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 27 ottobre 2009 : 19:52:08
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C'è qualcuno che ha un'idea di quanto (in moli o gr intendo) enzima di restrizione ci potrebbe essere in una confezione di EcoRI, per es. di 10 Unità/microlitro, di qualsiasi ditta (Invitrogen, Fermentas,NEB etc.etc...). Cioè mi serve di avere un'idea di quante moli (picomoli o quello che è...) ci possono in media stare in 1 microlitro, contenente 10 UI, di EcoRI......
Per es., se faccio un SDS_PAGE con 10 o 100 microlitri di EcoRI che mi hanno venduto a 10 U/microlitro, vedo la banda della proteina su gel oppure no?
grazie, Letizia
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 27 ottobre 2009 : 20:22:11
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Dovresti sapere a quanto equivale 1U, varia da enzima a enzima.
Una U è la quantità di enzima che converte 1umol di substrato al minuto.
Citazione:
Per es., se faccio un SDS_PAGE con 10 o 100 microlitri di EcoRI che mi hanno venduto a 10 U/microlitro, vedo la banda della proteina su gel oppure no?
Per quale motivo vorresti correre un enzima di restrizione su gel?
Ad ogni modo il fatto che tu veda o meno la banda dipende dalla bontà del metodo di rilevazione che usi. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 27 ottobre 2009 : 20:35:06
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Concordo con chick, non è una quantità precisa e riguardo agli enzimi di restrizione la definizione precisa di un'unità è:
Citazione:
Unit Definition:
One unit is defined as the amount of enzyme required to digest 1 µg of #955; DNA in 1 hour at 37°C in a total reaction volume of 50 µl.
(da EcoRI - NEB)
Ma per quale motivo scusa dovresti fare un SDS-PAGE con EcoRI comprato? |
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riccio
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 28 ottobre 2009 : 09:29:38
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grazie ragazzi.....niente, speravo che a qualcuno fosse capitato ....
Io devo "lavorare" (ora è troppo lungo spiegare in dettaglio) con una quantità nota (molare)di EcoRI + substrato (x es. coppia di oligo complementari di 60-70 nt o PCR di circa 200 bp)...e allora, prima di chiedere una mano ai biochimici e ottenere una prep pura di Eco da un ceppo iperproduttore (come è descritto in letteratura),
mi sarebbe piaciuto fare delle prove grezze,,,per aggiustarmi certi parametri....
cmq ripropongo la questione, non si sa mai...se faccio un SDS_PAGE con 10 o 100 microlitri di EcoRI che mi hanno venduto a 10 U/microlitro, vedo la banda della proteina su gel (e quindi posso quantizzarla) oppure no?
P.S.in questo momento sono fuori sede e non posso ovviamente farmi un SDS-PAGE...ma c'ho 'sto tarlo che mi rosica....
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riccio
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 28 ottobre 2009 : 09:42:52
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ah....naturalmente intendevo: SDS-PAGE o Bradford, per es.....
Letizia |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2009 : 00:49:13
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Beh la risposta più ovvia sarebbe, "provaci".
Comunque un'altra cosa che puoi fare è provare a sentire il servizio tecnico delle varie ditte che lo vendono e sentire se ti possono dare questa informazione.
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Enzimi di restrizione: ma quanto ce n'è?
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