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nanci
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
21 Messaggi |
 Inserito il - 21 dicembre 2006 : 22:46:25
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ciao ragazzi. potrà essere banalissimo come problema ma...... ho un dubbio. Devo tagliare un vettore con 2 enzimi di restrizione Hind III e KpnI . Devo defosforilare il vettore dopo taglio? Penso non sia necessario visto che i tagli non danno sequenze che possano complementare. Non defoforilo? 
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 22 dicembre 2006 : 13:29:08
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Beh..dipende a cosa ti serve dopo!!!
Se in ogni sito di taglio devi interporre un inserto,
allora ci penserà questo a riportare gruppi fosfato
per il suo ligaggio. Diversamente ligare potrebbe
risultarti un po' più complicato... |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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bioalimentari
Nuovo Arrivato
Prov.: ce
Città: teano
36 Messaggi |
Inserito il - 23 dicembre 2006 : 17:32:41
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generalmente non si defosforila.
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nanci
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
21 Messaggi |
Inserito il - 23 dicembre 2006 : 19:37:42
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| Il taglio del vettore con questa doppia digestione mi servirà per poter inserire il mio frammento (194 bp) a sua volta tagliato con gli stessi enzimi con cui ho trattato il vettore. |
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RNA world
Utente Junior
370 Messaggi |
Inserito il - 27 dicembre 2006 : 20:11:14
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Non defosforilare assolutamente, fai pure la ligazione con il tuo inserto e vedrai che la resa sarà ugualmente buona.
Ciao! |
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nanci
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
21 Messaggi |
Inserito il - 27 dicembre 2006 : 21:33:28
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OK.allora dopo taglio passo direttamente alla ligazione. Grazie mille .
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nanci
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
21 Messaggi |
Inserito il - 27 dicembre 2006 : 21:35:59
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| ringrazio tutti. |
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max power
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2009 : 20:54:52
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| la defosforilazione del vettore viene effettuata x aumentare l'efficienza della ligazione. Infatti facendola sul vettore, solo l'inserto porta i gruppi fosfato e ciò favorisce il legame. |
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Gst
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Ariccia
143 Messaggi |
Inserito il - 07 novembre 2009 : 08:50:55
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| mmmh... io avrei usato la fosfatasi alcalina dopo la digestione! Perchè la sconsigliate?! |
Ascoltami con gli occhi... |
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-maddy-
Nuovo Arrivato
Città: cagliari-torino
50 Messaggi |
Inserito il - 10 novembre 2009 : 21:34:30
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| anche a me hanno insegnato prima della ligazione a defosforilare con la fosfatasi alcalina in modo che il vettore una volta linearizzato non ricircolarizzi (prima che tu abbia inserito l'inserto), poi i gruppi fosfato saranno inseriti nuovamente perchè contenuti nell'inserto stesso |
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Discussione |
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defosforilazione vettore
Didattica
