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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
 Inserito il - 09 febbraio 2010 : 21:32:51
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Salve a tutti...
Vorrei che mi aiutaste a capire perche' si parla di proteine di fusione nell'espressione genica..
Sul mio testo c'è scritto che quando voglio esprimere una proteina di fusione la sequenza codificante la proteina eterologa..(cioe' estranea)puo' essere inserita in testa o in coda rispetto a quella della proteina ospite ..ma come??? Come si sintetizza la proteina di fusione?
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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
Inserito il - 09 febbraio 2010 : 23:29:38
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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 10:08:19
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Invece di perdere del tempo con H2O che a mio avviso tutto voglia tranne che una mano in molecular , c'è qualcuno di voi che sa' indirizzarmi sul quesito posto ???
Spero che gfpina mi aiuti come sempre !! l'esame è tra pochissimoooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooo  |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 10:13:26
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Ti prego di leggere bene il regolamento del forum:
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5) Nessuno è MAI obbligato a rispondere a nessun messaggio. Se lo fa è per sua pura gioia e gaudio. Evitare quindi di mandare un messaggio ogni 10 minuti chiedendo di rispondere alla propria domanda.
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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 10:29:20
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Scusami non volevo offendere nessuno...qui' c'è gente competente ma quello di gfpina è' l'unico nome che ricordo in quanto mi ha sempre risposto!! scusa ancora...aspettero' la risposta di esperti come te ma vado avanti da sola!! grazie mille e scusa ancora..non volevo offendere ...è solo che quando vedo che 10 esperti rispondono a un perditempo mi girano!
buona giornata ! |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 11:32:04
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ciao proverò ad aiutarti per espressione genica si intendono delle variazioni a livello dell'RNA messaggero, quindi uno studio sull'espressione genica è mirato a vedere variazioni di geni in seguito a diversi stimoli; non capisco il nesso con le proteine di fusione...non sempre il livello die spressione di un gene a livello del messaggero è correlato con la sua espressione proteica. per fare una proteina di fusione si usa in genere un vettore di espressione in cui inseriamo la sequenza della proteina che vogliamo trascrivere e tradurre, e a valle di questa sequenza si usa spesso un tag, cioè una sorta di "bandiera" che ci permette di identificare la proteina di interesse per esempio un tag di istidine facilemente identificabili con un western, o altri tag che possono legarsi a resine ecc. per produrre le proteine si usano cellule competenti batteriche; si inserisce il vettore in esse,si mettono in coltura e si estraggono le proteine.
spero di esserti stata utile |
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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 12:36:04
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grazie mille per la risposta che mi ha chiarito dei concetti....ma hai delle immagini che mi aiutino a far capire l'inserimento in testa o in coda dellasequenza codificante la proteina eterologa rispetto a quella ospite??è qui il mio problema !
GENTILISSIMO!! |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 12:58:53
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| si come si fa a inserire le immagini? |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 13:03:27
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ti ho mandato l'immagine in un messaggio privato.
ps sono una ragazza |
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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 13:45:27
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| SEI UN TESORO |
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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:14:09
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scusa ma dove l'hai inviato il messaggio di posta?
sulla mia email? |
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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:22:23
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| cortesemente inviami un sms qui(myaurora@live.it) |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:26:08
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| guarda su messaggi in arrivo di questo forum |
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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:28:28
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| purtroppo non mi fa accedere |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:34:16
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che strano.....
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Stella86
Nuovo Arrivato
42 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:36:15
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| molto strano!!mi faresti un enorme favore se mi invii il contenuto del tuo sms di posta...cosi' comincio a studiare! |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:38:23
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in questa immagine vedi un vettore che contiene giò la sequenza per gst, che come ti dicevo si lega ad una resina e puoi identificarlo; a valle puoi inserire la tua sequenza codificante della proteina di interesse utilizzando gli enzimi di restrizione a monte di gst
Immagine:
www.biovisualtech.com/bvplasmid/pGEX-5X-3.htm |
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Stella86
Nuovo Arrivato
42 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:41:06
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grazieeee di cuore!sei stata gentilissima! |
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Stella86
Nuovo Arrivato
42 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:43:20
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| anche se da quell'immagine nn ci ho capito un gran che' |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 14:50:07
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è la mappa di un vettore; in ogni vettore ci sono varie cassette di sequenza come per es la resistenza a un antibiotico, uno o due promotori, e una mappa di restrizione cioè ti indica che enzimi puoi usare per linearizzarlo e inserire una sequenza target. in questo vettore c'è una sequenza che codifica per gst (www.biovisualtech.com/bvplasmid/pGEX-4T-1.htm). a valle di essa ci sono le sequenze di taglio di alcuni enzimi. tu puoi utilizzare per es bamh1 e xho per tagliare il vettore e tramite una reazione di ligasi inserire la sequenza di interesse. una volta che inserisci il vettore in cellule batteriche competeti essi trascriveranno e tradurranno la tua proteina legata a gst. per recuperare la tua proteina di fusione utilizzi una resina che lega gst.
più chiaro ora? |
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Stella86
Nuovo Arrivato
42 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 15:07:10
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| correggimi se sbaglio...io devo utilizzare lo stesso enzima sia per tagliare il vettore che la sequenza target giusto?? perche' ricordo che il mio professore mi diveva il contrario ! |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2010 : 15:18:22
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| si devi usare lo stesso oppure nella tua sequenza target aggiungi il sito di restrizione |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 11 febbraio 2010 : 00:16:52
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Scusa Stella, ma non sempre c'è qualcuno disponibile a rispondere alle domande.
Tieni sempre presente che questo è un forum e chi partecipa sono studenti o persone che lavorano in laboratorio e rispondono durante il tempo libero, che spesso non è molto.
Io ad es. oggi non ne ho avuto un gran che e leggo il forum a quest'ora.
Inoltre tieni presente che a domande complicate è più difficile ottenere una risposta, appunto perchè ci vuole tempo a scriverle.
A una domanda a cui bisogna rispondere solo si o no è più facile rispondere anche con 5 minuti a disposizione.
Ma il bello del forum è che partecipano molte persone, quindi, se non può uno potrà un altro!
Inoltre il forum ha anche un'altra bella particolarità (anche quella riportata nel regolamento)
Citazione:
8) Il forum possiede una funzione "Cerca", ottima per cercate possibili topic (anche vecchi) che contengano già le risposte alle vostre domande.
Se l'avessi utilizzata avresti trovato ad es. discussioni tipo queste:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=6149
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=13697
nell'ultima ho dovuto modificare l'immagine perchè non più disponibile, comunque le immagini le vengono da: http://en.wikipedia.org/wiki/His_tag
anche se non vuoi leggerti tutto guarda le immagini che sono esplicative!
ad es. questa: http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/0/0c/His-tag.png/764px-His-tag.png
Infine, scusa eh, ma non mi sembra il caso di tirare in ballo un utente che non sta partecipando al forum da tempo, accusando gli altri di perdere tempo con lui anziché rispondere a te.
In ogni caso tutti hanno gli sessi diritti qui e si cerca quanto meno di non fare preferenze. Se ad una domanda non viene risposto e ad un'altra si non è certo per fare favoritismi.
per rispondere alle altre domande
Citazione:
Messaggio inserito da michy2
si come si fa a inserire le immagini?
se l'immagine è un link utilizzi il tag image  inserendo il link all'interno: [img ]link[ /img]
se invece è un'immagine tua che hai sul PC e vuoi allegare al forum utilizzi  allega file. (attenzione al copyright)
Citazione:
Messaggio inserito da stella 86
purtroppo non mi fa accedere
se cerchi di accedere dal link che vedi alla tua destra a volte da dei problemi, era già stato segnalato qui: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=12446
Il modo migliore per accedere ai messaggi privati è dalla pagina principale del forum: http://www.molecularlab.it/forum/default.asp
(in fondo trovi: Messaggi in arrivo) |
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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
Inserito il - 14 febbraio 2010 : 15:58:55
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Grazie gfpina....io cerco ma nn so' perche' ogni volta nn mi da' nulla! penso sia relato ai miei problemi di connessione...prima di aprirsi una pagina sto 2 ore!
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