| Autore |
Discussione |
|
|
azzurramol
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 09 marzo 2010 : 15:23:59
|
salve a tuttiho un problema enorme e misterioso con la mia pcr
è sempre venuta, ma da un paio di settimane a questa parte non viene più un tubo. mi si amplifica solo una delle due bande che dovrei vedere e la trovo in tutti i campioni, bianco compreso!
ho già provato a cambuare qualsiasi cosa.. aiuto!!!
|
|
|
|
|
mak_steon
Utente Junior
138 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2010 : 16:09:44
|
Il positivo lo hai messo?
Come è venuto?
Puoi darci qualche altra info, tipo lunghezza ampliconi, tipologia di reazione, target, tipo di DNA? |
 |
|
|
cami
Utente Junior
Città: roma
136 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2010 : 16:28:08
|
se vedi una banda anche nel bianco l'ipotesi più probabile è che tu abbia una contaminazione, hai provato a cambiare i reagenti? ma è una PCR post RT? il noDNA e il noRNA sono entrambi "strani"?
effettivamente però servirebbe qualche informazione in più... se la banda sparisce misteriosamente, può trattarsi di degradazione del DNA, o può essere un problema di RT, nel caso tu parta da RNA, se la banda è molto bassa potresti avere un problema di artefatto dei primers, etc, insomma, le ipotesi sono molteplici, se ci dai qualche dettaglio in più FORSE riusciamo ad aiutarti!  |
|
|
|
Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2010 : 16:54:37
|
se esce anche il bianco, (che penso stia per controllo negativo), dovresti provare
1) pulire le pipette, decontaminandole, oppure usare puntali con filtro
2) cambiare i reagenti, probabilmente c'è una contaminazione.
quando il bianco non viene più, cominci a testare le condizioni per un tuo controllo positivo.
3) es. cambiare i primers ed i nucleotidi, dopo cicli di congelamento/scongelamento non sono più buoni, cambia aliquote.
In bocca al lupo
 |
|
|
|
prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2010 : 18:19:26
|
| confermo.... succedeva anche nel mio lab e c'era contaminazione xk così è nel bianco nn dovresti vedere nulla, solo al massimo la banda dei dNTP. quindi si fa come ti ha detto neuroscience. |
Aiuto in biochimica?guarda qui
Info sul lavoro di biologo?guarda qui |
|
|
|
matsche
Nuovo Arrivato
Prov.: PV/CA
Città: Pavia/Cagliari
23 Messaggi |
Inserito il - 14 marzo 2010 : 19:07:16
|
| bianco compreso...per me è una contaminazione come dice cami, butta l'acqua che stai usando e ricordati eventualmente non l'avessi fatto di usare puntali cotonati per evitare cross-contaminazione, butta anche tutti i reagenti che hai usato e cambiali. Il controllo positivo? viene con entrambe le bande alla lunghezza che desideri? se no cambia pure quello! Ultima cosa hai usato sempre la stessa marca di enzima per la pcr o variato qualche altro reagente? (da buffer a buffer dipende dalla marca e dal tipo di prodotto variano le concentrazioni saline ad es. alcune polimerasi hanno buffer con già dentro il magnesio altre no). |
"Sapere aude! Habe Mut, dich deines eigenen Verstandes zu bedienen!
Sapere aude! Abbi il coraggio di servirti della tua propria intelligenza!" Immanuel Kant
...Après moi, le déluge... |
|
|
| |
Discussione |
|
pcr problem
Didattica
