dubbio sul doppio ibrido

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mariolini
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 21 settembre 2004 : 14:02:14

..Uffa � sempre lo stesso saggio a darmi problemi:Doppio ibrido!!!!
il mio dubbio � questo:
Nel momento in cui ho preparato i due costrutti e li metto nel plasmide,se col plasmide vado a trasfettare una cellula di lievito come faccio la tappa di selezione?!Cio� il gene reporter verr� cmq trascritto da proteine Gal4 endogene..o no?Non c'� interferenza visto che Gal4 � un fattore di trascr proprio del lievito?
per favore aiutatemi se potete,l'esame e domani!!
Scusate l'eventuale ignoranza..ho le idee un po' confuse

Rando
Nuovo Arrivato

Prov.: Lodi

17 Messaggi

Inserito il - 21 settembre 2004 : 19:57:54

Il ceppo ospite che devi usare � Gal4� (altrimenti -come dici- attiverebbe lui),
e Gal80� (altrimenti reprimerebbe Gal4).

La tappa di selezione viene fatta, come sempre col lievito, per auxotrofia.
Il che significa che il ceppo di lievito � anche deficitario di alcuni geni per la biosintesi degli aminoacidi, e questi geni (ura, trp, ...) sono presenti nei costrutti di trasformazione.

mariolini
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 21 settembre 2004 : 23:24:52

..grazie mille Rando!!Il problema � che questo esame l'ho preparato in poco tempo e con poco materiale(avevo solo dei pessimi appunti!)..b�,si vedr�!Ancora grazie