sequenziamento massivo e metodo sanger

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CpGislands
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3 Messaggi

Inserito il - 22 settembre 2010 : 12:01:08

Salve una domanda banale...
perchè tecniche di sequenziamento sono dette massive?
nel classico sequenziamento con metodo Sanger se si vuole usare il fosforo radioattivo devono essere marcati sia i dNTPs che il primer? e con la chemioluminescenza?

grazie

tittideby
Nuovo Arrivato

65 Messaggi

Inserito il - 23 settembre 2010 : 16:52:18

1)massivo deriva dal fatto che con quel tipo di tecnica riesci a sequenziare cluster di molecole...cioè ad ottenre un gran numero di molecole dello stesso tipo...addirittura fino a 60 milioni con il metodo 454 e ben 600 milioni con il metodo solexa.
2)nel metodo sanger quello che si marca è il ddNTP ovvero i terminatori della reazione.....credo non cambi a seconda del fatto che utilizzi la radioattività o la fluorescenza.Poichè il sanger viene effettuato tramite elettroforesi capillare....ad ogni ddNTP marcato che si lega corrisponde una luce emessa perchè,lo stesso (ddNTP) viene attraversato da un raggio laser.Quindi attraverso l'elettroforesi capillare otterai una serie di frammenti che si saranno separati in virtù del fatto che ognuno termina in corrispondenza di un ddNTP diverso.
Spero di essere stata chiara e di aver chiarito i tuoi dubbi.....ciaooooooooooo