ciao... non sono riuscita a sviluppare dalla membrana di nitrocellulosa al fil con il reagente ECL, nessun reagente è scaduto anticorpo primario, secondario, reagente ecl e reagenti di sviluppo... potrebbe essere dovuto al fatto che ho incubato tutta la notte a 20 gradi invece che 4?
in effetti quando ho incubato a 4 ° ha funzionato... ma è davvero così importante la temperatura? potrei provare ad incubate 1 ora a temperatura ambiente?
L'incubazione overnight a 4 gradi viene fatta per evitare aspecificità, altrimenti si usa fare 60 o 90 minuti a RT. Inoltre ti consiglierei di usare al posto dell'ECL il femto super signal della Thermo per avere un buon segnale anche nel caso in cui questo sia debole.