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Barbaryna
Nuovo Arrivato

47 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2010 : 03:57:55

sulle dispense del prof c'è scritto: quando vado a marcare una sonda nucleotidica con la biotina, sfrutto la sua elevata affinità di legame per l'avidina, la quale è legata a sua volta con la fosfatasi alcalina....ora la mia domanda è la seguente:è una reazione di tipo colorimetrico?se si, qual'è il substrato della fosfatasi alcalina affinchè ci sia una reazione colorimetrica?l'avidina viene messa in soluzone nel campione da analizzare??grazie!!!

SpemannOrganizer
Utente

Città: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2010 : 10:40:51

immagino che si parli di sonde per in situ. In genere il substrato cromogeno che si usa è il BCIP/NBT che sotto azione della fosfatasi alcalina forma un precipitato di colore blu. non ho mai usato l'avidina o nucleotidi con biotina (noi per le in situ usiamo nucleotidi marcati con digossigenina o fluoresceina, e corrispondenti anticorpi coniugati con AP). Immagino comunque ci sia una incubazione del tuo campione con l'avidina, dopo eventuali bloccaggi e inattivazione delle fosfatasi endogene.

Barbaryna
Nuovo Arrivato

47 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2010 : 12:17:52

Grazie per avermi risposto!!!cmq sulle dispense non viene fatta alcuna specificazione, si parla in generale delle sonde nucleotidiche e dei metodi di marcatura e spiega, quindi, brevemente la marcatura con il sistema biotina-avidina...forse perchè poi avremo un esame specifico su biotecnologie e affini...