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Lucia
Nuovo Arrivato
Prov.: Caserta
Città: Caserta
19 Messaggi |
 Inserito il - 27 novembre 2006 : 19:45:42
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Ciao, non ho capito bene a cosa ti serve il buffer di lisi, cmq io per estrarre il DNA da sangue periferico lisavo le cellule con il seguente buffer:
Saccarosio 109,5g
TrisHCl (1M pH8) 10ml
MgCl2 (1M) 5ml
Sciogliere in 900ml di H2Obd e poi aggiungervi 10ml di TritonX100.
Autoclavare e conservare a 4°C.
Questo Buffer usa come detergente il Triton X100 che ha un'azione blanda, infatti lisa solo la parete cellulare e non quella nucleare
eliminando gli eritrociti e preservando i nuclei dei linfociti.
Se vuoi estrarre il DNA devi risospendere il precipitato in 3ml T20E5, cui si aggiungono 200microl di SDS10% (detergente) e 100microl di Proteinasi K(10mg/ml). L’SDS è un detergente che agendo sui lipidi rompe la membrana nucleare, il T20E5 è un tampone che inattiva le endonucleasi che rischierebbero di degradare il DNA mentre la proteinasi K è un enzima che degrada le proteine. Spero di esserti stata un minimo di aiuto. Ciao e buon lavoro!! |
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Lysis Buffer per sangue intero
Didattica
