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Discussione |
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bombergigi
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
 Inserito il - 21 novembre 2008 : 11:50:23
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salve a tutti, mi sono appena iscritto a questo forum e spero qualcuno mi possa aiutare.
non sono un biologo molecolare, ma per motivi lavorativi nel prossimo progetto dovrò avere a che fare con queste cose, o almeno riuscire a capire di cosa si tratta quello che leggo, quindi...
credo di aver capito che il TOPO Ta Cloning sia un plasmide ingegnerizzato al quale viene inserito il prodotto di PCR che voglio...
Credo anche di aver capito che una miniprep è un processo di isolamento plasmidico...
la mia domanda qual'è la sequenza o l'iter di questi procedimenti?
grazie
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miky76
Utente Junior
126 Messaggi |
Inserito il - 21 novembre 2008 : 12:09:59
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allora
quando cloni....
cerco di descrivertelo in maniera elementare senza usare termini troppo scientifici
non so bene se sei biologo o no
allora
hai una soluzione che contiene plasmidi con il tuo inserto e plasmidi senza il tuo inserto (parlo del prodotto PCR)
questo normalmente lo ottieni dopo la reazione di ligasi (T4 ligasi)
a questo punto per scoprire quale e' il plasmide con l'inserto
trasformi dei batteri.... li piastri... ottieni colonie e fai miniprep dalle singole colonie
e ottieni la miniprep positiva (quella con inserto PCR)
spero ora ti sia piu chiaro |
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bombergigi
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 21 novembre 2008 : 12:39:40
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grazie sei stato chiaro. spero.
non sono un biologo e credo che questo sia solo il primo di una lunga serie di dilemmi...ahaa
infatti...
come si fa a vedere se poi la miniprep è positiva?
ciao |
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morgan79
Utente Junior
Prov.: Bari
143 Messaggi |
Inserito il - 21 novembre 2008 : 14:07:26
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http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=10756
le positive le riconosci mediante estrazione del DNA plasmidico e corsa su gel di agarosio, colony PCR o sequenziamento con i primer universali che di solito vengono forniti col vettore |
il sapere non è sufficiente, bisogna applicare; il volere non è sufficiente, bisogna fare |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1915 Messaggi |
Inserito il - 21 novembre 2008 : 22:59:54
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Citazione:
Messaggio inserito da miky76
questo normalmente lo ottieni dopo la reazione di ligasi (T4 ligasi)
se e' topo... in questo caso non serve |
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