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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
 Inserito il - 15 settembre 2011 : 17:09:54
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Qualcuno conosce una ditta alternativa a Invitrogen e Promega che mi possa fornire un vettore per TA cloning? Ho bisogno solo il vettore e non tutto il kit con Ligasi, Buffer ecc... pare sia una cosa molto difficile o ti prendi tutto il kit o niente!
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 16 settembre 2011 : 17:29:35
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Grazie della risposta RM!
In effetti questa ditta sembra vendere anche solo il vettore, il fatto di comprare solo il vettore era uno scrupolo mio, perchè personalmente mi scoccia spendere soldi per comprare cose che ho già e non mi servono (come la ligasi)
Ma visto che non ho problemi di soldi ma ho molto poco tempo e sia l'opzione di farmelo da sola (che avevo già escluso a priori), sia comprarlo da un nuovo fornitore mi richiederebbero troppo tempo (ah la burocrazia!), dovrò optare per il kit completo!
Al massimo mi rivendo la ligasi!  (scherzo!)
Grazie comunque 
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thejoint84
Nuovo Arrivato
46 Messaggi |
Inserito il - 18 settembre 2011 : 14:30:46
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Qualcuno si è adattato qualche vettore per il TA cloning? Vorrei sapere quanto tempo può prendere e se servono enzimi speciali,
Grazie!! |
http://cornermolecularbiology.blogspot.com/
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
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thejoint84
Nuovo Arrivato
46 Messaggi |
Inserito il - 21 settembre 2011 : 13:19:24
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Grazie per i protocolli.... ma mi sorge un dubbio... dopo aver tagliato il plasmide in modo da avere blunt end, aggiungo la T con Taq. Penso peró che la Taq a 72 gradi per 2h aggiunga molte piú di una sola T...
Mi conviene forse aggiungere uno stretch di A al mio prodotto di pcr (invece della sola A lasciata dalla reazione con la Taq)???
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http://cornermolecularbiology.blogspot.com/
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 21 settembre 2011 : 13:35:09
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| la taq polimerasi (non proofreading) aggiunge da sè diverse A al tuo prodotto di PCR, mica una sola. |
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
Inserito il - 21 settembre 2011 : 17:54:49
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Penso che non sia necessario. Per quanto ne so, a me risulta che la Taq aggiunge una singola A ed una singola T. Il lavoro originario almeno riporta così.
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 21 settembre 2011 : 18:06:24
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Citazione:
Messaggio inserito da RM
Per quanto ne so, a me risulta che la Taq aggiunge una singola A ed una singola T. Il lavoro originario almeno riporta così.
Si' è vero, ho controllato ora. Aggiunge una singola A |
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thejoint84
Nuovo Arrivato
46 Messaggi |
Inserito il - 21 settembre 2011 : 22:16:02
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Allora non mi tocca che provarlo..... se mi va bene mi salto un bel passaggio di clonaggio in pGEM-T , selezione cloni, mini-prep, digestione, purificazione dell'inserto e secondo clonaggio.....
Grazieeee, vi farò sapere come va!!!! |
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