basse concentrazioni di DNA e subcloning

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mandolino
Nuovo Arrivato

Citt�: Trondheim

17 Messaggi

Inserito il - 06 maggio 2008 : 08:52:53

Ciao, devo clonare un frammento di 3700bp, che ottengo per PCR inversa, in pMOSblue ma la concentrazione e' talmente bassa (circa 14ng) che non riesco a farlo incorporare..ho provato a fare un PCR sul prodotto di PCR ma ottengo solo aspecifici..cosa suggerite per ottenere una concentrazione maggiore di frammento?

darkene
Utente Junior

291 Messaggi

Inserito il - 06 maggio 2008 : 14:46:38

fare pi� reazioni di PCR, unirle, precipitarle e risospenderle in un volume pi� piccolo. anche io in tesi dovevo clonare una regione promotrice di 5000bp e avevo il tuo problema. cos� ho risolto!

mandolino
Nuovo Arrivato

Citt�: Trondheim

17 Messaggi

Inserito il - 06 maggio 2008 : 15:48:35

Grazie mille! credo proprio che procedero' in questo modo!

cicciola dott
Nuovo Arrivato

Prov.: Bari
Citt�: bari

5 Messaggi

Inserito il - 07 maggio 2008 : 00:49:50

strano che tu ottenga sempre aspecifici....
nn pensi alla mix inquinata...??
l'unico modo � uello ke ti hanno suggerito poi x concentrare al limite ci sono le clonnone della millipore